As leishmanioses são um grupo de doenças tropicais causadas por protozoários do gênero Leishmania sp.. A LV (LV) é a forma mais severa, podendo ser fatal se não tratada. A LV afeta principalmente crianças, adultos acima de 50 anos, pessoas com comorbidades ou imunossuprimidas. A maioria dos casos de LV ocorre no Brasil, leste da África e Índia. A transmissão é feita por flebotomíneos, com os cães atuando como fontes principais de infecção para esses vetores. Muitos infectados não apresentam sintomas, indicando uma resposta imune eficaz. Esse estudo busca entender como a resposta imune eficaz funciona em pacientes assintomáticos com LV. Isso é importante para desenvolver vacinas e tratamentos eficazes. O objetivo deste estudo é investigar o impacto das múltiplas infecções na carga parasitária em camundongos. Para tal, avaliamos como diferentes quantidades de inóculos de promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum influenciam na infecção experimental. Inicialmente, padronizamos o modelo utilizando camundongos BALB/c do tipo selvagem (wildtype, WT). Os animais foram distribuídos aleatoriamente em três grupos, denominados respectivamente como Grupo Controle, Grupo G1 e Grupo G2. Os animais do Grupo Controle permaneceram sem qualquer infecção, enquanto os do Grupo G1 foram submetidos a uma única inoculação contendo 1x107 promastigotas de L. (L) infantum. Por sua vez, os animais do Grupo G2 foram submetidos a quatro inoculações semelhantes. Posteriormente, para análise e comparação entre os grupos, o tamanho amostral foi aumentado. Além disso, para investigar o papel do interferon-gama (IFN-), camundongos knockout para esse gene (GKO) foram incluídos no estudo e distribuídos em grupos semelhantes aos do modelo WT. Após 30 dias da infecção, os animais foram eutanasiados e amostras biológicas (sangue da cauda, sangue total, baço, fígado) foram coletadas. Usamos PCR em tempo real para medir a densidade parasitária (parasitas/mg de proteínas) nos órgãos. Realizamos ensaios sorológicos, incluindo ELISA convencional (ELISAc) para anticorpos IgG anti-Leishmania, e ELISA dissociativo (ELISAd) para imunocomplexos circulantes (CIC). Utilizamos citometria de fluxo para analisar linfócitos. Também examinamos tecidos por microscopia corada com hematoxilina e eosina. Foi observado que uma única dose de promastigotas de L. (L) infantum é mais eficaz para induzir infecção no fígado e baço em comparação com múltiplas doses. Isso resultou em menor produção de anticorpos específicos e não foi influenciado pelo IFN-. O estudo também estabeleceu uma medida de densidade parasitária nos órgãos, permitindo quantificar a infecção por L. (L) infantum nos camundongos BALB/c. Com inóculos semanais repetidos, observou-se menor infecção nos tecidos, aumento da produção de anticorpos e aumento das células produtoras de anticorpos nos camundongos. A ausência IFN- não afetou a infecção única nem os efeitos de múltiplos inóculos no modelo experimental, conforme comparado com os resultados obtidos em animais selvagens. Os resultados do estudo podem ajudar a compreender melhor a transmissão da doença e contribuir para estratégias de controle mais eficazes. Além disso, esses resultados fornecerão insights sobre a imunopatologia da doença em modelos animais e caninos

Leishmaniases are a group of tropical diseases caused by protozoa of the genus Leishmania sp. Visceral leishmaniasis (VL) is the most severe form and can be fatal if left untreated. VL mainly affects children, adults over 50 years old, individuals with comorbidities, or immunosuppressed individuals. The majority of VL cases occur in Brazil, East Africa, and India. Transmission is carried out by sandflies, with dogs acting as the main sources of infection for these vectors. Many infected individuals remain asymptomatic, indicating an effective immune response. This study aims to understand how this effective immune response functions in asymptomatic VL patients. This is important for developing vaccines and effective treatments. The objective of this study is to investigate the impact of multiple infections on parasite load in mice. To do this, we assessed how different quantities of Leishmania (Leishmania) infantum promastigotes inocula influence experimental infection. Initially, we standardized the model using wild-type (WT) BALB/c mice. The animals were randomly assigned to three groups, respectively named Control Group, G1 Group, and G2 Group. Control Group animals remained uninfected, while G1 Group animals were subjected to a single inoculation containing 1x107 L. (L) infantum promastigotes. G2 Group animals, on the other hand, were subjected to four similar inoculations. Subsequently, for analysis and comparison between groups, the sample size was increased. Additionally, to investigate the role of interferon-gamma (IFN-), knockout mice for this gene (GKO) were included in the study and distributed into groups similar to the WT model. After 30 days of infection, the animals were euthanized, and biological samples (tail blood, total blood, spleen, liver) were collected. We used real-time PCR to measure parasite density (parasites/mg of proteins) in the organs. We conducted serological assays, including conventional ELISA (ELISAc) for anti-Leishmania IgG antibodies, and dissociative ELISA (ELISAd) for circulating immune complexes (CIC). We used flow cytometry to analyze lymphocytes. We also examined tissues through hematoxylin and eosin-stained microscopy. It was observed that a single dose of L. (L) infantum promastigotes is more effective in inducing liver and spleen infection compared to multiple doses. This resulted in lower production of specific antibodies and was not influenced by IFN-. The study also established a measure of parasite density in the organs, allowing for the quantification of L. (L) infantum infection in BALB/c mice. With repeated weekly inocula, lower tissue infection was observed, along with increased antibody production and increased antibody-producing cells in the mice. The absence of IFN- did not affect single infection or the effects of multiple inocula in the experimental model, as compared to results obtained in wild-type animals. The study's findings can help better understand disease transmission and contribute to more effective control strategies. Additionally, these results will provide insights into the immunopathology of the disease in animal and canine models