Diversos estudos em modelos experimentais de doença renal crônica (DRC) evidenciaram efeito renoprotetor usando células-tronco mesenquimais (MSC) extraídas de tecidos extra renais. Por outro lado, nós demonstramos pela primeira vez na literatura, que células c-kit+Lin- isoladas de rim de ratos em desenvolvimento (neonatos) exibem propriedades de células-tronco e capacidade regenerativa, verificadas após uma lesão renal aguda do tipo isquemia e reperfusão. Adicionalmente, nosso estudo recente em modelo de glomerulonefrite aguda induzido por puromicina também evidenciou que as células c-kit+Lin- contribuem para o reparo do citoesqueleto podocitário. Embora nossos estudos tenham mostrado a melhora em modelos de doença aguda e em glomerulopatia seu potencial regenerativo ainda não foi testado para doença renal crônica. Sendo assim, o objetivo principal do presente estudo é testar de forma pioneira a capacidade regenerativa das células c-kit+Lin- isoladas de rim de ratos neonatos e compará-las com as células tronco mesenquimais para o tratamento da doença renal crônica no modelo experimental de nefrectomia 5/6. Após aprovação no CEUA (n 945/17), foram usados 40 ratos Wistar machos (6 a 8 semanas de idade, peso 240-280g) e randomizados em quatro grupos com n=10 em cada: (1) sham, (2) Nx, (3) Nx+MSC, (4) Nx+C-KIT. Os grupos tratados receberam 1×10 células por via subcapsular 15 dias após a nefrectomia (fase de doença já estabelecida). Todos os animais foram submetidos à medição de pressão arterial caudal (PAC) e coleta de urina de 24 horas. No 15 dia após inoculação das células, todos os animais foram eutanasiados para coleta de sangue e realização de imunohistoquímica e imunofluorescência e análise histológica e morfológica. Nossos resultados demonstraram uma elevação das escórias nitrogenadas (média de creatinina = 0,73 vs 0,44 mg/dL e uréia=124 vs 59 mg/dL), da PAC (205 vs 143 mmHg), e da proteinúria (235 vs 18 mg/24hs) e albuminúria (5,4 vs 0,5 mg/24hs) mostrando que os animais desenvolveram DRC em todos os grupos submetidos à Nx quando comparados ao sham. Notadamente, apenas o grupo Nx+MSC foi capaz de reduzir a PAC (-32%). Entretanto, ambos os grupos tratados apresentaram melhora significativa da proteinúria (~60%) e da albuminúria (~70%). Digno de nota, houve redução intensa de proliferação celular (PCNA) após uso das MSC sendo que o tratamento com as c-kit+Lin- praticamente não levou a mudança no padrão de proliferação celular. Em relação a inflamação , observamos um aumento (~50%) de CD43 no grupo Nx, e o tratamento com MSC bloqueou quase completamente a sua expressão. Já o grupo Ckit também reduziu a expressão de CD43, porém em menor proporção do que o grupo NX+MSC. Similarmente, a expressão de linfócitos T aumentou no grupo Nx, e praticamente foi bloqueada com uso de MSC e inalterada com o uso das c-kit+Lin-. Na avaliação dos mac,rófagos nos diferentes grupos, foi observado que no grupo Nx houve aumento global e significativo das populações de M1 e M2, e somente o tratamento com células MSC diminuíram a expressão dos macrófagos a níveis normais e semelhante ao grupo sham. Em contrapartida, o grupo Ckit apresentou um aumento bastante significativo de de 1,5x de marcação em relação aos os animais com DRC, tanto na expressão de M1 quanto M2. Especificamente, é importante ressaltar que a quantidade de marcação para M2 exibiu um aumento maior nos animais tratados com células c-kit+Lin- revelando que estas células também agem de forma anti-inflamatória modulando a resposta inata. Chama a nossa atenção em relação ao evento de fibrose intersticial que após 30 dias da indução da DRC, ambos os tratamentos apresentaram similarmente menor grau de fibrose intersticial (~50%) pelo Tricrômico de Masson comparado ao grupo não tratado. Para finalizar, houve aumento da glomeruesclerose global e segmentar em todos os animais submetidos ao procedimento de Nx e ambos os tratamentos não mostraram melhora deste parâmetro. Visto em conjunto, chegamos à conclusão que nossos resultados sugerem pela primeira vez que as células ckit+Lin- tecido específica renal podem ser usadas como uma nova alternativa terapêutica para diminuição da progressão da DRC em modelo experimental. Futuros experimentos e estudos pré-clínicos usando as células ckit+Lin- são necessários para explorar e entender melhor os mecanismos de ação destas células

Several studies in experimental models of chronic kidney disease (CKD) have shown a renoprotective effect using mesenchymal stem cells (MSC) isolated from extra-renal tissues. On the other hand, we demonstrated for the first time in the literature that c-kit+Lin- cells isolated from the kidney of developing rats (neonates) exhibit stem cell properties and regenerative capacity, verified after an acute kidney injury of the ischemia and reperfusion model. Additionally, our recent study in a model of acute glomerulonephritis induced by puromycin also showed that c-kit+Lin- cells contribute to the repair of the podocyte cytoskeleton. Although our studies have shown improvement in models of acute disease and in glomerulopathy, its regenerative potential has not yet been tested for chronic kidney disease. Therefore, the main objective of the present study is to test in a pioneering way the regenerative capacity of c-kit+Lin- cells isolated from the kidney of newborn rats and compare them with mesenchymal stem cells for the treatment of chronic kidney disease in the experimental model of nephrectomy 5/6. After CEUA approval (n 945/17), 40 male Wistar rats (6 to 8 weeks old, weight 240-280g) were used and randomized into four groups with n=10 in each: (1) sham, (2) Nx, (3) Nx+MSC, (4) Nx+C-KIT. Treated groups received 1×10 cells subcapsularly 15 days after nephrectomy (established disease phase). All animals underwent measurement of caudal arterial pressure (CAP) and 24-hour urine collection. On the 15th day after cell inoculation, all animals were euthanized for blood collection and immunohistochemistry and immunofluorescence and histological and morphological analysis. Our results showed an increase in nitrogenous compounds (mean creatinine = 0.73 vs 0.44 mg/dL and urea = 124 vs 59 mg/dL), CAP (205 vs 143 mmHg), and proteinuria (235 vs 18 mg/24hs) and albuminuria (5.4 vs 0.5 mg/24hs) showing that the animals developed CKD in all groups submitted to Nx when compared to sham. Notably, only the Nx + MSC group was able to reduce CAP (-32%). However, both treated groups showed significant improvement in proteinuria (~60%) and albuminuria (~70%). Noteworthy, there was an intense reduction in cell proliferation (PCNA) after the use of MSCs, and treatment with c-kit+Lin- practically did not change the pattern of cell proliferation. Regarding inflammation, we observed an increase (~50%) of CD43 in the Nx group, and MSC treatment almost completely blocked its expression. The C-KIT group also reduced CD43 expression, but to a lesser extent than the NX+ MSC group. Similarly, the expression of T lymphocytes increased in the Nx group, and was practically blocked with the use of MSC and unaltered with the use of c-kit+Lin-. Evaluation of macrophages in the different groups, it was observed that in the Nx group there was a global and significant increase in the populations of M1 and M2, and only the treatment with MSC cells reduced the expression of macrophages to normal levels and similar to the sham group. On the other hand, the Ckit group showed a very significant increase in staining a round 1.5x in comparison to the animals with CKD, both in the expression of M1 and M2. Specifically, it is important to emphasize that the amount of staining for M2 showed a greater increase in animals treated with c-kit+Lin- cells, revealing that these cells also act in an anti-inflammatory way, modulating the innate response. It draws our attention in relation to the interstitial fibrosis event that after 30 days of CKD induction, both treatments similarly presented a lower degree of interstitial fibrosis (~50%) by Masson's Trichrome compared to the untreated group. Finally, there was an increase in global and segmental glomeruesclerosis in all animals submitted to the Nx procedure and both treatments did not show improvement in this parameter. Taken together, we came to the conclusion that our results suggest for the first time that renal-tissue specific ckit+Lin- cells can be used as a new therapeutic approach to decrease the progression of CKD in an experimental model. Future experiments and preclinical studies using ckit+Lin- cells are needed to explore and better understand the mechanisms of action of these cells