A hipóxia tumoral é um fator de resistência bem estabelecido para radioterapia e quimioterapia sistêmica. É um fator prognóstico importante, preditivo de recidiva, metástase e sobrevida reduzida. Vários estudos relatam evidências de normalização vascular decorrentes de agentes vasoativos empregados como terapia antiangiogênica direta ou indireta, tendo como um dos principais desfechos a redução transiente de regiões de hipóxia. A avaliação do efeito dos compostos vasoativos sobre o efeito de oxigenação dos tecidos, que somente era possível por técnicas invasivas, passou a ser realizada por método não invasivo e longitudinal, utilizando métodos de imagem como a tomografia por emissão de fóton único (SPECT) ou a tomografia por emissão de pósitron (PET), com o uso de radiofármacos sensíveis às condições de hipóxia/normóxia. Neste trabalho preparamos dois radiofármacos para serem utilizados como marcadores da presença de hipóxia em tecidos tumorais, o [99mTc]Tc-HL91, foi obtido através de reconstituição de conjunto de reativo liofilizado (kit) produzido na instituição, contendo o ligante 4,9-diaza-3,3,10,10- tetrametildodecano-2,11-diona-dioxima (HL91), e o [18F]FAZA foi obtido através da reação do íon [18F]fluoreto com o precursor 1-(2,3-diacetil-5-tosil-?-DArabinofuranosil)- 2-nitroimidazol, seguido de hidrólise. O processo de normalização vascular foi avaliado em um grupo de camundongos Balb/c com implante ortotópico de células de tumor de mama da linhagem murina 4T1, tratados com doses diárias de losartana potássica (40 mg/Kg), administrada por gavagem, por período de até 12 dias, e um grupo de animais tratado com solução hidroalcoólica a 5 % (veículo) nas mesmas condições, para ser utilizado como controle. Após 9 e 12 dias do início do tratamento, foram realizadas imagens por SPECT/CT, utilizando o [99mTc]Tc-HL91, ou por PET/CT, utilizando o [18F]FAZA, em equipamento Trifoil Triumph Trimodality® dedicado à imagem de pequenos animais. Após reconstrução, as imagens foram processadas utilizando os programas de computador 3D Slicer e AMIDE. Alguns animais foram eutanasiados após a realização das imagens, para determinação da concentração da radioatividade nos diferentes órgãos e realização de imagem autorradiográfica do tumor, bem como para a realização de ensaios histoquímico, com eosina/hematoxilina, e imuno-histoquímico, com anti-pimonidazol e anti-CD31. Os dados numéricos foram tratados estatisticamente utilizando testes como o Kolmogorov-Smirnov, Levenne, T de Student e ANOVA. O radiofármaco [99mTc]Tc- HL91 foi obtido com eficiência de marcação e pureza radioquímica superior a 95 %; o [18F]FAZA apresentando eficiência de marcação de 27 % (não corrigido para o decaimento) e pureza radioquímica maior que 94 %. A captação tumoral média do [99mTc]Tc-HL91 normalizada pelo músculo (relação T/M) dos animais tratados com losartana, não demonstrando significância estatística (p= 0,233) avaliada pelo teste T de Student; por outro lado, a captação do [18F]FAZA foi menor nos animais tratados com losartana (p= 0,022). A associação da análise de dados obtidos da autorradiografia, histoquímica e imuno-histoquímica, permitiu demonstrar a correspondência entre as regiões de hipóxia determinada pelos radiofármacos e a determinada por imuno-histoquímica com anti-pimonidazol, bem como demonstrar que a alta concentração dos radiofármacos não estava relacionada às regiões de vasos sanguíneos, determinada por anti-CD31. Assim, podemos concluir que a preparação e utilização de dois diferentes radiofármacos foram importantes para os estudos, com observação de diferença no volume tumoral, quando avaliada por diferentes métodos de imagem, mas dada a heterogeneidade do processo de normalização e limitações quanto aos protocolos de manejo dos animais e das técnicas de imagem, não foi possível alcançar um dos objetivos do trabalho, qual seja, a determinar a janela temporal entre o tratamento e a normalização vascular dos tumores.

Tumor hypoxia is a well-established resistance factor for radiotherapy and also as a resistance factor to systemic chemotherapy. It is an important prognostic factor as a predictor of recurrence, metastasis and reduced survival. Several studies report evidence of vascular remodeling resulting from vasoactive agents used as direct or indirect antiangiogenic therapy, with one of the main outcomes being a transient reduction of hypoxia regions. The evaluation of the effect of vasoactive compounds on the oxygenation effect of tissues, which was only possible by invasive techniques, started to be performed by a non-invasive and longitudinal method, using imaging processes such as single photon emission tomography (SPECT) or positron emission tomography (PET), with the use of radiopharmaceuticals sensitive to hypoxia / normoxia conditions. In this work, we prepared two radiopharmaceuticals to be used as markers of the presence of hypoxia in tumor tissues; the [99mTc]Tc-HL91, was obtained through reconstitution of a set of lyophilized reactive (kit) produced at the institution, containing the ligand 4,9-diaza-3,3,10,10-tetramethyldodecane-2,11-dionedioxima (HL91), and [18F]FAZA was obtained by reacting the [18F]fluoride ion with the precursor 1-(2,3-diacetyl-5-tosyl-?-D-Arabinofuranosyl)-2-nitroimidazole, followed by hydrolysis. The vascular remodeling process was evaluated in a group of Balb/c mice implanted with breast tumor cells of the murine lineage 4T1, treated with daily doses of losartan potassium (40 mg / kg), administered by gavage, for a period of up to 12 days, and a group of animals treated with 5% hydroalcoholic solution (vehicle) under the same conditions, to be used as a control. Nine and 12 days after the beginning of the treatment, images were taken by SPECT/CT, using [99mTc]Tc-HL91, or by PET/CT, using [18F]FAZA, in Triumph Trimodality® equipment dedicated to the image of small animals. After reconstruction, the images were processed using the 3D Slicer and AMIDE computer programs. Some animals were euthanized after the images, and organs were taken to determine the concentration of radioactivity of them, and to perform the autoradiographic image of the tumor, as well as to perform histochemical tests, with eozine/hematoxylin, and immunohistochemistry, with anti-pimonidazole and anti-CD31. The numerical data were treated statistically using tests such as Kolmogorov-Smirnov, Levenne, Student's T and ANOVA. The radiopharmaceutical [99mTc]Tc-HL91 was obtained with labeling efficiency and radiochemical purity greater than 95%; and [18F]FAZA was obtained in 27% radiolabeling yield (uncorrected for decay) and radiochemical purity greater than 95%. The mean tumor uptake for [99mTc]Tc-HL91, normalized by the muscle (T/M ratio) of the animals treated or not with losartan, showing no statistical significance (p = 0.233), assessed by the Student T test; on the other hand, uptake of [18F]FAZA was lower in animals treated with losartan (p = 0.022). The association of the analysis of data obtained from autoradiography, histochemistry and immunohistochemistry, allowed to demonstrate the concomitance between the regions of hypoxia determined by radiopharmaceuticals and that determined by immunohistochemistry with anti-pimonidazole, as well as demonstrating that the high concentration of radiopharmaceuticals was not related to blood vessel regions, determined by anti-CD31. Thus, we can conclude that the preparation and use of two different radiopharmaceuticals were important for the studies, with observation of difference in tumor volume, when evaluated by different imaging methods, but given the heterogeneity of the remodeling process and limitations regarding management protocols of animals and imaging techniques, it was not possible to achieve one of the objectives of the study, namely, to determine the time window between treatment and vascular remodeling of tumors.