Introdução: A resposta imune desempenha um papel importante na eliminação das infecções causadas pelo HPV. Como estratégia de evasão do sistema imunológico, o vírus pode modular a produção e secreção de citocinas pelas células infectadas. Além disso, a resposta imune pode contribuir para a criação de um quadro de inflamação crônica, que favorece a progressão das lesões relacionadas ao vírus e o desenvolvimento do câncer. Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da via da interleucina-1, mais especificamente IL-1alfa, IL-1beta e IL-18, importantes citocinas pró-inflamatórias, no estabelecimento e progressão dos tumores cervicais. Material e métodos: Queratinócitos normais e transduzidos com os oncogenes E6 e/ou E7 de HPV16, além das linhagens tumorais de origem cervical C33, SiHa e HeLa, foram avaliados quanto à expressão (transcritos e proteínas) de IL-1alfa, IL-1beta, IL-18, seus receptores e antagonistas naturais. O gene codificador de IL-18 foi editado por meio do sistema CRISPR-Cas9, e as linhagens celulares silenciadas foram avaliadas quanto à capacidade de invasão, migração, proliferação, viabilidade e indução da angiogênese. Além disso, 62 biópsias provenientes de pacientes diagnosticadas com câncer cervical avançado foram analisadas por imuno-histoquímica visando à avaliação da expressão de IL-18 nos tecidos tumorais e sua relação com o prognóstico. Resultados: Foi verificado que, embora presente nos queratinócitos normais e transduzidos com os oncogenes do HPV, a expressão de IL-1alfa e IL-1beta encontra-se drasticamente reduzida nas linhagens tumorais de origem cervical, ao contrário de IL-18, que permanece sendo expressa de forma significativa. O silenciamento de IL-18 por CRISPR-Cas9 reduziu a capacidade proliferativa e de formação de colônias das linhagens tumorais cervicais HPV positivas, mas associou-se à tendência de maior capacidade invasiva e de indução da angiogênese. A análise imuno-histoquímica das biópsias mostrou que a expressão de IL-18 na borda dos tumores está associada à resposta completa ao tratamento e menor risco de recorrência linfática (p=0.027 e p=0.034, respectivamente). Embora não se tenha atingido significância estatística, observou-se clara tendência a maiores taxas de sobrevida global e sobrevida livre de doença nos tumores em cuja localização do infiltrado inflamatório era peritumoral (p=0.056 e p=0.165, respectivamente). Da mesma forma, a maior expressão de IL-18 no núcleo e no citoplasma das células tumorais foi associada à tendência de melhor prognóstico. Conclusões: Considerando-se os resultados acima expostos, verificou-se que, embora presentes nos queratinócitos normais e transduzidos com os oncogenes de HPV16, IL-1alfa, IL-1beta, seu antagonista natural e seus receptores são modulados negativamente de forma importante nas linhagens tumorais de origem cervical C33, SiHa e HeLa. Ao contrário, IL-18, seu antagonista natural e seus receptores continuam sendo expressos nas mesmas células. A análise conjunta dos resultados envolvendo as linhagens silenciadas para IL-18 e dos dados obtidos por imunohistoquímica sugere um papel protetor de IL-18, que deve ser confirmado por meio da ampliação da amostra estudada. Deve ser considerada a interação entre as células tumorais e o microambiente, mais especificamente, neste caso, o microambiente imune tumoral, no qual IL-18 constitui um importante mediador. Pretende-se que esta seja a próxima etapa deste estudo

Introduction: The immune response plays an important role in clearing HPV infections. As a strategy to evade the immune system, the virus can modulate cytokine production and secretion by infected cells. In addition, the immune response can contribute to create a chronic inflammatory condition, which can favor the progression of virus related lesions and cancer development. Objectives: The objective of this study was to evaluate the role of the interleukin-1 pathway, more specifically IL-1alpha, IL-1beta and IL-18, important pro-inflammatory cytokines, in the establishment and progression of cervical tumors. Material and methods: Normal keratinocytes and keratinocytes transduced with HPV16 E6 and/or E7 oncogenes, in addition to the cervical tumor cell lines C33, SiHa and HeLa, were evaluated for the expression (transcripts and proteins) of IL-1alpha, IL-1beta, IL-18, their natural antagonists and receptors. The gene encoding IL-18 was edited using CRISPRCas9 system, and silenced cell lines were evaluated for invasiveness, migration, proliferation, colony-forming capacity and angiogenesis induction. In addition, 62 biopsies from patients diagnosed with advanced cervical cancer were assessed by immunohistochemistry to assess IL-18 expression in tumor tissues and its relationship with the patients' prognosis. Results: It was found that, although present in normal and transduced keratinocytes, the expression of IL-1alpha and IL-1beta is drastically reduced in cervical tumor cell lines, in contrast to IL-18, which remains expressed in a meaningful way. IL-18 silencing by CRISPR-Cas9 reduced the proliferative and colony-forming capacity of HPV-positive cervical tumor cell lines, but was associated with the tendency towards greater invasive capacity and angiogenesis induction. The biopsies immunohistochemical analysis showed that IL-18 expression at the edge of the tumor is associated with a complete response to the treatment and a lower risk of lymphatic recurrence (p=0.027 and p=0.034, respectively). Although no statistical significance was reached, there is a clear tendency towards higher rates of overall survival and disease free survival in tumors showing peritumoral location of the inflammatory infiltrate (p=0.056 and p=0.165, respectively). Likewise, the increased IL-18 expression in tumor cells nucleus and cytoplasm was associated with a trend towards better prognosis. Conclusions: Considering the above results, it was found that, although present in normal and transduced keratinocytes, IL-1alpha, IL-1beta, their natural antagonist and receptors are significantly negatively modulated in cervical tumor cell lines C33, SiHa and HeLa. In contrast, IL-18, its natural antagonist and receptors continue to be expressed in the same cells. Together, IL-18 silenced cells analysis and immunohistochemistry data suggest a protective role for IL-18, which should be confirmed by expanding the studied sample. The interaction between tumor cells and the microenvironment must be considered, more specifically, in this case, the tumor immune microenvironment, in which IL-18 is an important mediator. This is intended to be the next stage of this study