O melanoma é um tipo de câncer agressivo de difícil tratamento em casos avançados tanto na medicina humana quanto na veterinária. Apesar do progresso considerável nas propostas terapêuticas, as taxas de mortalidade ainda são elevadas, tornando necessário o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas. Os melanomas frequentemente apresentam disfunções na via de p53, embora frequentemente retenha a proteína p53 selvagem. Em estudos anteriores, nosso grupo utilizou vetores adenovirais para a transferência genica de p14ARF (proteína supressora de tumor) a fim de reativar a via p53 em células murinas e humanas, tanto in vitro quanto vivo. A co-transdução com IFN (citocina imunomoduladora) induziu níveis especialmente elevados de morte celular juntamente com a liberação de marcadores imunogênicos de morte celular in vitro, redução significativa da progressão tumoral e estimulação de fortes respostas imunes in vivo. Antes de prosseguirmos para testes em humanos, desejamos verificar estes resultados em modelo animal que represente melhor a complexidade dos casos humanos de melanoma, incluindo a capacidade de formar tumores espontâneos e metástases. Portanto, este trabalho teve como objetivo desenvolver vetores adenovirais que codificam os genes p14ARF e IFN caninos, a fim de validar nossa abordagem em um modelo utilizando linhagens celulares de melanoma oral canino previamente estabelecidas em nosso laboratório. Consistente com nossos estudos anteriores em linhagens celulares humanas e de camundongos, observamos que essa combinação de vetores induziu morte celular acompanhada pela liberação de fatores imunogênicos, como ATP e HMGB1 nas linhagens celulares caninas GAB-F6 e BAN-C10. Num modelo de xenoenxerto de terapia genética in situ, demonstramos a inibição da progressão tumoral in vivo, o atraso no desenvolvimento do tumor e a sobrevida prolongada dos animais. Estes resultados apoiam o futuro teste desta abordagem terapêutica em pacientes veterinários, um passo importante no desenvolvimento da nossa terapia genética para o melanoma

Melanoma is an aggressive kind of cancer, difficult to treat in advanced cases in both human and veterinary medicine. Despite the considerable progress in therapeutic proposals, mortality rates are still high, making it necessary to develop new therapeutic approaches. Melanomas often present a dysfunctional p53 pathway, although it frequently retains the wild type protein. In previous studies, our group has used adenoviral vectors for the transfer of p14ARF (tumour suppressor protein) in order to reactivate the p53 pathway in murine and human cells, both in vitro and vivo. Co-transduction with IFN (immunomodulatory cytokine) induced especially high levels of cell killing along with the release of immunogenic cell death markers in vitro, significant reduction of tumour progression and stimulation of a strong immune responses in vivo. Before moving to human tests, we wish to verify these outcomes in animal models that more closely represent the complexity of human cases of melanoma, including the capability to form spontaneous tumours and metastases. Therefore, this work aimed to develop adenoviral vectors encoding the canine p14ARF and IFN genes in order to validate our approach in a model utilizing canine oral melanoma cell lines previously established in our laboratory. Consistent with our previous studies in mouse and human cell lines, we observed that this combination of vectors induced cell death accompanied by the release of immunogenic factors, such as ATP and HMGB1 in the canine cell lines GAB-F6 and BAN-C10. In a xenograft model of in situ gene therapy, we demonstrated the inhibition of tumour progression in vivo, and delay of tumour development and extended survival. These results support testing this therapeutic approach in veterinary patients, an important step in the development of our melanoma gene therapy