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Mémoire de Maîtrise
DOI
10.11606/D.5.2004.tde-15102014-105917
Document
Auteur
Nom complet
Thiago Manzoni Jacintho
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2004
Directeur
Jury
Waitzberg, Dan Linetzky (Président)
Lee, André Dong Won
Pinto Junior, Paulo Engler
Titre en portugais
Efeitos de diferentes emulsões lipídicas sobre a expressão de moléculas de superfície envolvidas no processo de apresentação de antígenos em células mononucleares humanas in vitro
Mots-clés en portugais
Ácidos graxos
Apresentação de antígeno
In vitro
Leucócitos mononucleares
Nutrição parenteral
Resumé en portugais
Moléculas HLA-DR e co-estimulatórias tem papel central na função imune de leucócitos. Diferentes emulsões lipídicas (EL) podem alterar funções imunes de leucócitos. Para avaliar os efeitos de diferentes EL sobre a expressão de moléculas HLA-DR, CD80 e CD86 presentes na superfície de monócitos/macrófagos (MO/M?) e CD28 e CD152 presentes na superfície de linfócitos T auxiliares (L? CD4) humanos, células mononucleares do sangue periférico de voluntários saudáveis (n=10) foram separadas com uso de Ficoll Hypaque (d=1,007) e incubadas por 48 horas (MO/M?) e 72 horas (L?) em meio RPMI 1640 acrescidas ou não (controle negativo) de diferentes EL comerciais ou misturas experimentais na concentração de 1mg/mL. De acordo com o tipo da emulsão lipídica adicionada ao meio de cultura, as células foram divididas em seis grupos experimentais: a) Controle negativo - células mononucleares cultivadas sem o acréscimo de EL b) TCLn-6 - células mononucleares cultivadas com EL a base de óleo de soja rica em ácidos graxos poliinsaturados tipo n-6 (AGPI n-6), c) TCLn-6/TCLn-3 - células mononucleares cultivadas com mistura experimental contendo 80% da EL a base de óleo de soja e 20% de EL a base de óleo de peixe rica em AGPI tipo n-3, d) TCM/TCLn6 - células mononucleares cultivadas com EL composta por 50% óleo de coco, rico em triglicérides de cadeia média e 50% de óleo de soja, e) TCM/TCLn-3 - células mononucleares cultivadas com mistura experimental contendo 80% de EL composta por 50% óleo de coco e 50% de óleo de soja e 20% de EL a base de óleo de peixe, f) SMOF - células mononucleares cultivadas com a nova EL contendo 30% de óleo de soja, 30% de triglicérides de cadeia média, 25% de óleo de oliva e 15% de óleo de peixe. As células mononucleares foram ativadas pelo uso de 10?g/mL de fitohemaglutinina. A expressão das moléculas de superfície foi analisada por citometria de fluxo. A porcentagem de fluorescência, que indica o número de células expressando as moléculas em estudo e a intensidade de fluorescência, que indica de forma indireta o número de moléculas expressas por células, foram medidas. Os resultados obtidos foram submetidos à teste estatístico Friedman e pós-teste Student-Newman-Keuls, adotando-se nível de significância de p<0,05. Devido às diferenças na expressão basal dos doadores, os resultados de intensidade de fluorescência foram transformados em porcentagem relativa ao controle basal (Basal=100). Nos grupos TCLn-6, TCLn-6/TCLn-3, TCM/TCLn-6, TCM/TCLn-3 e SMOF, a intensidade de fluorescência de moléculas HLA-DR expressas na superfície de monócitos/macrófagos diminuiu (medianas = 87,6; 84,0; 81,0; 85,0 e 80,0 respectivamente) em relação ao controle negativo (CN) (mediana=100,0) p=0,01. Todos os grupos tratados com EL aumentaram o número de linfócitos T auxiliares expressando moléculas CD28 (medianas = 90,9; 90,4; 91,5; 92,6 e 90,1 respectivamente) em relação ao CN (mediana=82,8) p=0,001 e também o número de moléculas CD152 expressas por células na superfície de linfócitos T auxiliares (medianas = 120,6; 108,8; 127,7; 114,6 e 121,3 respectivamente) em relação ao CN (mediana=100,0), p=0,03. Não foram encontradas diferenças estatísticas na expressão de moléculas CD80 e CD86 na superfície de monócitos/macrófagos cultivados com diferentes EL. Ainda não foram encontradas diferenças no número de linfócitos T auxiliares expressando CD152. Finalmente a expressão por células de moléculas CD28 na superfície de linfócitos T auxiliares também não mostrou alteração significante com as diferentes emulsões lipídicas. Conclusão: Emulsões lipídicas parenterais in vitro, diminuem a expressão de moléculas HLA-DR na superfície de monócitos/macrófagos e aumentam a expressão de moléculas CD28 e CD152 na superfície de linfócitos T auxiliares humanos. Estas alterações podem ser um dos mecanismos pelos quais as EL modulam funções de células imunes
Titre en anglais
Effects of different lipid emulsions on surface molecules expression involved in antigen presentation process on human mononuclear cells in vitro
Mots-clés en anglais
Antigen presenting
Fatty acids
In vitro
Mononuclear leukocytes
Parenteral nutrition
Resumé en anglais
HLA-DR and co-stimulatory molecules play a central role on leucocytes immune function. Different lipid emulsions (LE) may change leucocytes immune function. It is of interest to study the effect of different LE on HLA-DR and costimulatory molecules expression. To access the effect of LE on the HLA-DR, CD80 and CD86 expression on monocytes/macrophages (MO/MØ) surface and CD28 and CD152 (CD80/CD86 co-stimulatory molecules receptor) expression on human T helper lymphocytes (LØ CD4) surface we obtained mononuclear cells from peripheral blood of healthy volunteers (n=10) by using ficoll hypaque (d=1.077). The cells were cultured for 48 hours (MOMØ) and 72 hours (LØ CD4) and incubated with RPMI 1640 medium without (negative control) or added with 1mg/mL of commercial or experimental mixtures of five LE. Groups: a) NC - negative control without LE, b) LCTn-6 - n-6 polyunsaturated fatty acids (PUFA) rich LE ( soybean oil), c) LCTFO - 80% of LCT and 20% of n-3 PUFA rich LE (FO) (fish oil), d) MCT/LCT - LE containing 50% of medium chain triglycerides and 50% of n-6 PUFA rich LE, e) MCT/LCTFO - 80% of MCT/LCT LE and 20% of FO LE and f) SMOF - a new LE containing 30% of soybean oil, 30% of medium chain triglycerides, 25% of olive oil and 15% of fish oil. Mononuclear cells were activated by using 10?g/mL of phytohemagglutinin. Surface molecules expression was measured by flow cytometry. Percentage and intensity of fluorescence were recorded and the data were submitted to Friedman statistical test and Student-Newman-Keuls post test (p<0,05). Due the differences in basal expression between donors, prior to statistical tests, data from intensity of fluorescence were transformed of percentage relative of basal expression (where basal=100). All LE groups LCT, LCTFO, MCT/LCT, MCT/LCTFO and SMOF decreased HLA-DR intensity of fluorescence on monocytes/macrophages (mean= 87.6, 84.0, 81.0, 85.0, and 80.0 respectively) in relation to negative control (NC) (mean=100.0) cultured without LE (p=0,01). All LE groups increased the percentage of lymphocytes expressing CD28 (means=90.9, 90.4, 91.5, 92.6 and 90.1 respectively) in relation to control (mean=82.8) p=0,001 and CD152 intensity of fluorescence on lymphocytes cultured with all different LE (mean=120,6; 108,8; 127,7; 114,6 and 121,3 respectively) in relation to NC (mean=100,0), p=0,03. No significant differences were found on CD80 and CD86 expression on monocytes/macrophages surface, CD28 intensity of fluorescence and the percentage of lymphocytes expressing CD152 on lymphocytes cultured with the different studied LE. Conclusion: In vitro parenteral LE decreased HLA-DR expression on human monocytes/macrophages surface and increase co-stimulatory molecules receptor expression on human lymphocytes surface. These changes could be one of the mechanisms of LE modulation of immune cells functions
 
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Date de Publication
2014-10-15
 
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