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Mémoire de Maîtrise
DOI
https://doi.org/10.11606/D.5.2020.tde-31102020-125503
Document
Auteur
Nom complet
Vanessa Ribeiro Guimarães Schreiter
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2020
Directeur
Jury
Leite, Katia Ramos Moreira (Président)
Faria, Sabrina Thalita dos Reis
Júnior, Nelson Gaspar Dip
Moura, Nayara Izabel Viana
Titre en portugais
Efeitos dos microRNAs 100 e 145 sobre seus genes alvo no câncer de próstata metastático - Estudo in vivo
Mots-clés en portugais
Biologia molecular
Ensaios antitumorais modelo de xenoenxerto
Expressão gênica
Metástase neoplásica
Micrornas
Neoplasias da próstata
Resumé en portugais
Introdução: O Câncer de Próstata (CaP) metastático é uma doença incurável cujo tratamento tradicional e mais eficiente é o bloqueio androgênico. Essa modalidade, entretanto, tem papel limitado e após período médio de cinco anos os tumores adquirem o status resistente à castração, sendo nessa fase as opções terapêuticas muito limitadas. O conhecimento de vias moleculares vem propiciando o desenvolvimento de moléculas ou anticorpos para serem utilizados como terapia alvo em diversos tipos de câncer. Os microRNAs (miRNAs) são pequenas moléculas, fundamentais para o controle da expressão de genes e a alteração de sua expressão tem sido descrita no processo de carcinogênese do CaP. Neste estudo avaliamos um possível papel dos miRNAs 100 e 145 em modelo in vivo de CaP metastático, no controle de seus genes alvo, KRAS, cMYC e SMARCA5. Objetivo: Analisar a atividade dos miRNAs 100 e 145 no tratamento do CaP metastático em camundongos atímicos e estudar os efeitos desse tratamento nos níveis de expressão de seus genes alvo cMYC, KRAS, mTOR e SMARCA5 no tecido tumoral. Métodos: Para a indução do CaP metastático, os camundongos machos Balb/c nude foram inoculados com células PC-3M-luc-C6 (linhagem bioluminescente) intra venticular esquerdo. Após a o estabelecimento da doença metastática, no dia 21, os animais foram separados em grupos de tratamentos com o miR-100, anti-miR-100 e miR-145 e seus respectivos controles negativos, associados ao atelocolágeno através de três injeções por via sistêmica com intervalos de 3 dias. As imagens do crescimento tumoral foram obtidas no equipamento IVIS (Spectrum). Três dias pós a última dose de tratamento (dia 30), os animais foram eutanasiados e o tecido tumoral foi avaliado por PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) para determinação do nível de expressão dos miRNAs 100 e 145 e de seus genes alvo cMYC, KRAS, mTOR e SMARCA5. Resultados: O grupo de animais tratado com miR-145 apresentou a menor velocidade de crescimento tumoral. O grupo tratado com miR-100 mostrou maior expressão intratumoral de miR-100 e subexpressão de mTOR. SMARCA5 esteve superexpresso neste grupo. Os animais tratados com anti-miR-100 mostraram redução na expressão de miR-100 intratumoral, subexpressão de mTOR e ausência de alterações em SMARCA5. No grupo tratado com miR-145 houve aumento dos níveis de expressão de miR-145 e redução dos níveis de KRAS e cMYC. Conclusão: Demonstramos em modelo in vivo o efeito dos miRNAs 100 e 145 sobre o crescimento tumoral e no controle de expressão de seus genes alvo mTOR, cMYC e KRAS
Titre en anglais
Effects of microRNAs 100 and 145 in in vivo model of metastatic prostate cancer
Mots-clés en anglais
Gene expression
MicroRNAs
Molecular biology
Neoplasm metastasis
Prostatic neoplasms
Xenograft model antitumor assays
Resumé en anglais
Introduction: Metastatic prostate cancer (PC) is an incurable disease which treatment is based on the androgen deprivation. Although efficient at the beginning, after a mean period of 5 years, tumor acquires a castration-resistant status, when therapies have less efficacy. The knowledge of molecular pathways involved with progression of PC have been responsible for the development of molecules and antibodies, improving the survival in many types of cancer. microRNAs are small molecules related to gene expression control, and alterations in their expression profile have been described in PC. In this study we evaluated the expression levels of target genes of miR-100 and 145, KRAS, cMYC, mTOR and SMARCA5 and their effects in an in vivo model of metastatic PC. Objective: To analyze the activity of miRNAs 100 and 145 in the treatment of metastatic PC in nude mice, and to study the effects of the miRNAs over their target genes KRAS, cMYC, mTOR and SMARCA5 in tumor tissue. Methods: Male Balb/c nude mice were inoculated with bioluminescent PC-3M-luc-C6 cell line. After the development of metastatic disease, on day 21, the animals were treated with miR-100, anti-miR-100 and miR-145, and their respective controls systemically with 3 days interval between them. In vivo images were obtained using the IVIS (Spectrum) equipment. Three days after the last dose (day 30), animals were sacrificed, and tumor tissues were stocked for molecular analysis. Expression levels of miR-100, miR-145 and their target controls, KRAS, cMYC, mTOR and SMARCA5 were detected by quantitative, real-time PCR (qRT-PCR). Results: Animals treated with miR-145 presented the lowest tumor growth among the groups. The examination of tumor tissue showed that miR-100 treated animals had high levels of miR-100 and lower expression of mTOR. SMARCA5 was underexpressed in this group. Animals treated with miR-145 showed higher expression of miR-145, and reduction in the levels of KRAS and cMYC compared to controls. Conclusion: We showed the effects of miR-100 and miR-145 over tumor growth and over the expression levels of their target genes mTOR, cMYC and KRAS in an in vivo model of metastatic PC
 
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Date de Publication
2020-10-31
 
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