INTRODUÇÃO: O Carcinoma de Células Renais, é uma neoplasia maligna que se origina no revestimento do túbulo contorcido proximal e durante décadas, pacientes com câncer renal, em sua maioria, submetem-se à nefrectomia radical ou parcial, devido as poucas opções de tratamento. O miR-21, é um microRNA que já foi associado ao crescimento celular e a inibição da apoptose em alguns tipos de câncer e em relação ao carcinoma de células renais, já foi demonstrada uma superexpressão deste miRNA sendo ainda mais relevante no tipo células claras, onde também já foi associado a um pior prognóstico. O miR-21 possui diversos genes alvos, como RECK e MMP9 que podem atuar em processos carcinogênicos. Com o aumento da exploração de estudos acerca da importância dos miRNAs, novas modalidades terapêuticas são desenvolvidas e, dentre elas, surgem os anti- miRs, que são ácidos nucleicos de cadeia simples modificados e sintetizados para se ligarem especificamente ao miRNA de interesse e inibir essas moléculas, levando ao objetivo da perda de expressão. OBJETIVOS: Baseado no potencial oncogênico do miR-21 realizamos a padronização da transfecção de anti-miR-21 em linhagem celular de carcinoma renal de células claras metastáticas (Caki-1), bem como a análise de expressão do miR-21 e de seus genes alvo (RECK e MMP9) pós transfecção. Por fim, realizamos ensaio de migração e imunofluorescência após a transfecção de anti-miR-21. METODOLOGIA: Inicialmente, cultivamos a linhagem Caki-1 em meio de cultura McCoy's 5a Medium Modified, suplementado com soro fetal bovino a 10% e solução antibiótica e antimicótica, após o cultivo realizamos a transfecção da linhagem com anti-miR-21 e realizamos a análise de expressão do miR e de seus genes alvo por meio da técnica de qPCR. Também realizamos ensaio de migração e imunoflorescência. Por fim, realizamos análise estatística considerando estatisticamente significantes os resultados com p-valor inferior a 5%. RESULTADOS:. Observamos uma diminuição estatisticamente significante da expressão do miR-21 demonstrando a eficácia da transfecção, além da diminuição da migração celular. Em relação ao gene alvo RECK, demonstramos um aumento significativo da expressão após a transfecção conforme esperado, entretanto o seu gene alvo MMP9 estava superexpresso após a transfecção, embora sem significância estatística. No ensaio de imunoflorescência evidenciamos aumento de expressão de RECK e diminuição de MMP9. DISCUSSÃO: Observamos que com a técnica de tranfecção de anti-miR-21, foi possível, efetuar a diminuição significativa da expressão do miR-21, assim como o aumento de expressão gênica e proteica de RECK, bem como diminuição proteica de MMP9, além da importante diminuição do potencial de migração da linhagem. Dessa forma, consideramos nossos resultados in vitro promissores, pois o miR-21 pode apresentar um papel importante para a progressão do câncer de rim metastático. Nosso trabalho demonstra que essa ferramenta de transfecção pode contribuir com o knockdown do miR-21 no CRCC e retardar sua migração celular. CONCLUSÃO: Concluímos que a metodologia utilizada para padronização da transfecção de anti-miR-21 foi efetiva, no qual as células apresentaram diminuição significante de miR-21 em relação ao controle, assim como um aumento de expressão do seu alvo RECK, porém não apresentou diferença entre MMP9 e controle. Identificamos uma diminuição no potencial de migração da linhagem estudada

INTRODUCTION: Renal cell carcinoma is a malignant neoplasm that originates in the lining of the proximal convoluted tubule. For decades, patients with renal cancer have mostly undergone radical or partial nephrectomy due to the limited treatment options. miR-21 is a microRNA that has already been associated with cell growth and inhibition of apoptosis in some types of cancer. About renal cell carcinoma, overexpression of this miRNA has already been demonstrated and is even more relevant in the clear cell type, where it has also been associated with a worse prognosis. miR-21 has several target genes, such as RECK and MMP9, which can act in carcinogenic processes. As more studies explore the importance of miRNAs, new therapeutic modalities are being developed, including anti-miRs, which are single-stranded nucleic acids modified and synthesized to bind specifically to the miRNA of interest and inhibit these molecules, leading to the objective of loss of expression. OBJECTIVES: Based on the oncogenic potential of miR-21, we standardized the transfection of anti-miR-21 in a metastatic clear cell renal carcinoma cell line (Caki-1), as well as analyzing the expression of miR-21 and its target genes (RECK and MMP9) after transfection. Finally, we performed a migration and immunofluorescence assay after anti-miR-21 transfection. METHODOLOGY: Initially, we cultivated the Caki-1 strain in McCoy's 5a Modified Medium, supplemented with 10% fetal bovine serum and antibiotic and antimycotic solutions. After cultivation, we transfected the strain with anti-miR-21 and analyzed the expression of miR and its target genes using the qPCR technique. We also carried out migration and immunofluorescence assays. Finally, we conducted a statistical analysis, considering results with a p-value of less than 5% to be statistically significant. RESULTS: We observed a statistically significant decrease in miR-21 expression, demonstrating the efficacy of transfection, as well as a decrease in cell migration. Regarding the RECK target gene, we demonstrated a significant increase in expression after transfection, as expected. However, its target gene, MMP9, was overexpressed after transfection, although without statistical significance. The immunofluorescence assay showed increased expression of RECK and decreased expression of MMP9. DISCUSSION: We observed that with the anti-miR-21 transfection technique, it was possible to significantly decrease miR-21 expression, as well as increase RECK gene and protein expression and decrease MMP9 protein, in addition to a significant decrease in the cell line migration potential. We, therefore, consider our in vitro results to be promising, as miR-21 may play an essential role in the progression of metastatic kidney cancer. Our work demonstrates that this transfection tool can contribute to the knockdown of miR-21 in CRCC and delay its cell migration. CONCLUSION: We conclude that the methodology used to standardize anti-miR-21 transfection was effective in that the cells showed a significant decrease in miR-21 compared to the control, as well as an increase in expression of its target RECK but showed no difference between MMP9 and control. We identified a decrease in the migration potential of the cell line studied