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Master's Dissertation
DOI
https://doi.org/10.11606/D.5.2020.tde-03072020-150741
Document
Author
Full name
Erica Maria Martins Coutinho
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2019
Supervisor
Committee
Barros, Myrthes Anna Maragna Toledo (President)
Costa, Priscilla Ramos
Giavina-Bianchi Junior, Pedro Francisco
Sini, Bruno Carnevale
Title in Portuguese
Avaliação de imunossenescência precoce em pacientes com imunodeficiência comum variável (ICV)
Keywords in Portuguese
Envelhecimento
Imunodeficiência comum variável
Imunossenescência
Linfócitos
Polimorfismo genético
Sistema imunitário
Telomerase
Abstract in Portuguese
A Imunodeficiência Comum Variável (ICV) é a imunodeficiência primária sintomática mais comum em adultos e caracteriza-se pela presença de baixos níveis de IgG e IgA e/ou IgM. Os pacientes com ICV apresentam infecções recorrentes do trato respiratório e intestinal; alterações nas populações linfocitárias; alteração na produção de citocinas; capacidade de ativação e proliferação de linfócitos reduzida e baixa resposta vacinal. Alem disso, podem ser acometidos por doenças autoimunes, autoinflamatórias e câncer. A imunosenescência é o processo de envelhecimento do sistema imunológico e tem como principais características as infecções constantes; alterações nas populações de linfócitos com proliferação de linfócitos CD28 negativos; inflammaging, resposta vacinal prejudicada e maior ocorrência de câncer e doenças autoimunes. Pelo fato das manifestações imunológicas e clínicas apresentadas durante a senescência traçarem um paralelo com o quadro clínico e laboratorial característico da ICV, nos fez questionar se os pacientes com essa imunodeficiência sofrem precocemente com o processo de imunossenescência. Para tanto, avaliamos em pacientes com imunodeficiência comum variável parâmetros imunológicos condizentes ao processo de imunossenescência em comparação a indivíduos idosos nãosenis e controles saudáveis. Ao todo participaram do estudo 33 indivíduos, sendo dezesseis (16) pacientes com ICV de ambos os sexos e idades variando de 18 a 49 anos, doze (12) idosas sem manifestação de senilidade sistêmica com idades variando de 65 a 90 anos e cinco (5) controles saudáveis de ambos os sexos e idades variando de 18 a 49 anos. Foram analisados polimorfismos no gene da ezima paraoxonase 1 (PON-1 L55M) através da obtenção do DNA genômico por método de salting out seguida da amplificação por PCR e digestão por enzimas de restrição, sendo possível a análise de RFLP. As populações linfocitárias TCD8+CD28-, TCD8+CD28+, TCD4+CD28- e TCD4+CD28+ foram analisadas através da imunofenotipagem por citometria de fluxo. A atividade de telomerase nos linfócitos TCD8+ foi realizada utilizando o método de TRAP seguido de reação de ELISA, para quantificação dos produtos da PCR. Em relação ao gênero, houve predominância do sexo feminino (p=0,008) no grupo de idosos (100%), no grupo de pacientes com ICV (56,3%) e no grupo de controles saudáveis (100%). A distribuição de brancos e não-brancos foi homogênea entre os grupos (p=0,281). A frequência dos genótipos de polimorfismos da PON-1 L55M foi similar (p=0,392) entre o grupo de pacientes com ICV (18,8%) 55MM; (43,8%) 55LM; (31,3%) 55LL e (6,3%) não detectado, e grupo de idosos (16,7%) 55MM, (25,0%) 55LM, (58,3%) 55LL. Não houve associação da frequência de polimorfismos da PON-1 L55M em pacientes com ICV às variáveis clínicas analisadas. A distribuição linfocitária TCD8+CD28- em relação ao número total de linfócitos TCD8+ foi caracterizada pela predominância de linfócitos TCD8+CD28- no grupo de ICV (mediana = 62,40) e no grupo de idosos (mediana = 68,95) (p=0,756). Em contrapartida, os valores de TCD8+CD28- dos controles saudáveis (mediana = 25,70) foram diminuidos em relação aos pacientes com ICV (mediana = 5,45) (p=0,005) e idosos (mediana = 3,70) (p=0,03). Os valores da população linfocitária TCD8+CD28+ foram similares (p=0,756) entre o grupo de pacientes com ICV (mediana = 37,35) e idosos (mediana = 31,00). Em contrapartida, os valores de TCD8+CD28+ dos controles saudáveis (mediana = 25,70) foram aumentados em relação aos pacientes com ICV (mediana = 37,35) (p=0,005) e idosos (mediana = 31,00) (p=0,03). A distribuição linfocitária TCD4+CD28- em relação ao número total de linfócitos TCD4+ foi similar entre o grupo de pacientes com ICV (mediana= 5,45) e idosos (mediana = 3,70) (p=0,336). Em contrapartida, os valores de TCD4+CD28- dos controles saudáveis (mediana 0,50) foram diminuidos em relação aos pacientes com ICV (mediana = 5,45) (p=0,002) e idosos (mediana = 3,70) (p=0,024). Os valores da população linfocitária TCD4+CD28+ foram similares entre os pacientes com ICV (mediana = 94) e idosos (mediana = 96) (p=0,311). A distribuição de TCD4+CD28+ nos controles saudáveis (mediana = 99) foi superior ao grupo de pacientes ICV (mediana = 94) (p=0,002) e ao grupo de idosos (mediana = 96) (p=0,026). Em relação à atividade de telomerase na população de linfócitos TCD8+ não existe diferença entre os grupos avaliados (p = 0,545). A predominância de linfócitos TCD8+CD28- nos pacientes com ICV, sendo similar ao grupo dos idosos, mostra que estes pacientes apresentam precocemente o processo de imunossenescência
Title in English
Evaluation of early immunosenescence in patients with common variable immunodeficiency (CVID)
Keywords in English
Aging
Common variable immunodeficiency
Immune system
Immunosenescence
Lymphocytes
Polymorphism genetic
Telomerase
Abstract in English
Common Variable Immunodeficiency (CVID) is the primary immunodeficiency of antibodies symptomatic most common in adults. It is characterizedby the presence of low levels of IgG and IgA and /or IgM. Patients have recurrent infections of the respiratory and intestinal tract; changes in lymphocyte populations; alteration in the production of cytokines; reduced ability to activation and proliferation of lymphocytes and low vaccine response. In addition, autoimmune, autoinflammatory diseases and cancer may affect them. Immunosenescence is the aging process of the immune system and its main features are constant infections; changes in lymphocyte populations with proliferation of lymphocyte CD28 negative; inflammaging, impaired vaccine response and increased occurrence of cancer and autoimmune diseases. Because the immunological and clinical manifestations presented during senescence draw a parallel with the clinical and laboratory characteristics of CVID, it made us question whether patients with this immunodeficiency have the early process of immunosenescence. Therefore, we evaluated in patients with common variable immunodeficiency consistent immunological parameters to immunosenescence process compared to non-senile elderly and healthy controls. A total of 33 individuals participated in the study, being sixteen (16) patients with CVID of both sexes and ages ranging from 18 to 49, twelve (12) elderly without systemic senile manifestation with ages ranging from 65 to 90 and five and five (5) healthy controls of both sexes and ages ranging from 18 to 49 years. Polymorphisms in the paraoxonase 1 gene (PON-1 L55M) were analyzed by genomic DNA extraction by salting out method followed by PCR amplification and restriction enzyme digestion, and RFLP analysis. The lymphocyte populations TCD8+CD28-, TCD8+CD28+, TCD4+CD28- and TCD4+CD28+ were analyzed by flow cytometry immunophenotyping. Telomerase activity in TCD8+ lymphocytes was performed using the TRAP method followed by ELISA reaction to quantify PCR products. In relation to gender, there was a predominance of females (p = 0.008) in the elderly group (100%), in patients with CVID (56.3%) and in the group of healthy controls (100%). The distribution of whites and nonwhites was homogeneous between the groups (p = 0.281). The frequency of PON-1 L55M polymorphism genotypes was similar (p = 0.392) among the group of patients with CVID (18.8%) 55MM; (43.8%) 55LM; (31.3%) 55LL and (6.3%) undetected, and elderly group (16.7%) 55MM, (25.0%) 55LM, (58.3%) 55LL. There was no association between frequency of PON-1 L55M polymorphisms in patients with CVID the clinical variables analyzed. The TCD8+CD28- lymphocyte distribution in relation to the total number of TCD8+ lymphocytes was characterized by the predominance of TCD8+CD28- lymphocytes in the CVID group (median = 62.40) and in the elderly group (median = 68.95) (p = 0.756). In contrast, TCD8+CD28- values from healthy controls (median = 25.70) were decreased compared to patients with CVID (median = 5.45) (p = 0.005) and elderly group (median = 3.70) (p = 0.03). The TCD8+CD28+ lymphocyte population values were similar (p = 0.756) between the group of patients with CVID (median = 37.35) and elderly group (median = 31.00). In contrast, TCD8+CD28 + values for healthy controls (median = 25.70) were increased compared to patients with CVID (median = 37.35) (p = 0.005) and elderly group (median = 31.00) (p = 0.03). The TCD4+CD28- lymphocyte distribution in relation to the total number of TCD4+ lymphocytes was similar between the group of patients with CVID (median = 5.45) and elderly group (median = 3.70) (p = 0.336). In contrast, TCD4+ CD28- values from healthy controls (median 0.50) were decreased compared to patients with CVID (median = 5.45) (p = 0.002) and elderly group (median = 3.70) (p = 0.024). The TCD4+CD28+ lymphocyte population values were similar between the patients with CVID (median = 94) and elderly group (median = 96) (p = 0.311). The distribution of TCD4+CD28+ in healthy controls (median = 99) was higher than the group of CVID (median = 94) (p = 0.002) and the elderly group (median = 96) (p = 0.026). Regarding telomerase activity in the TCD8+ lymphocyte population there is no difference between the groups evaluated (p = 0.545). The predominance of TCD8+ CD28- lymphocytes in the patients with CVID, being similar to the group of the elderly, shows that these patients present early the process of immunosenescence
 
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Publishing Date
2020-07-03
 
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