INTRODUÇÃO: A talidomida (TDH) é um fármaco imunomodulador e anticancerígeno; o monitoramento terapêutico de fármaco (TDM) é crucial para o ajuste de dose. Dried Plasma Spot (DPS) é uma estratégia de amostragem emergente, que pode permitir acesso a análise por HPLC-MS/MS mesmo em locais distantes. No presente estudo, foi desenvolvido e validado um método de cromatografia líquida de ultra alta eficiência acoplada à espectrometria de massas para quantificação de Talidomida em DPS e o comparamos com amostras de plasma úmido (WP). MÉTODOS: Plasma seco em DPS (200 L) e 100 L de WP foram tratados com acetonitrila e água para extração de THD, e os extratos foram submetidos à extração em fase sólida em linha e analisados em HPLC-MS/MS. O método foi validado para linearidade, limite de detecção e quantificação, exatidão, precisão, efeito matriz, eficiência de processo, efeito residual e de interferentes e diluição, e estabilidade. O método foi aplicado para quantificação de THD em amostras de plasma de pacientes com lúpus eritematoso cutâneo (LEC) tratados com THD preparadas em DPS e WP e para estudo de transporte de amostras dos pacientes, preparadas em DPS. RESULTADOS: A curva de calibração da razão de área do pico versus a concentração de THD foi linear na faixa de concentração de 50 a 2000 ng/mL (r2>0,990) para DPS e WP. O método tem um limite de detecção (LOD) de 20 ng/mL e um limite inferior de quantificação (LLOQ) de 50 ng/mL para THD em DPS e WP. A exatidão e precisão resultaram em erro padrão relativo na faixa de 1,3% a 8,9%, com coeficiente de variação (CV%) máximo de 18,6% (no LLOQ) e 8,6% em concentrações superiores, para DPS e WP. Considerando as concentrações baixa e alta para DPS e WP, efeito matriz foi na faixa de 100,6% a 107,0%; recuperação foi de 88,7% a 105,0%, e eficiência de processo foi entre 91,3% e 109,3%. Nenhum efeito residual, de interferentes ou de diluição foi observado. As soluções estoque do padrão de THD foram estáveis a -20°C por 30 dias e a - 80°C por 4 meses para DPS e WP. Além disso, as amostras de DPS foram estáveis por 14 dias em temperatura ambiente e a 45ºC. A quantificação de THD em amostra de plasma de oito pacientes com LEC apresentaram resultados de mediana 257,1 ng/mL (DPS) e 269,3 ng/mL (WP). O transporte entre locais distantes (até 9 dias e 41°C) de amostras dos pacientes resultou em decaimento de concentração não maior que 14% para DPS. CONCLUSÕES: O método validado para quantificar THD em DPS por UPLC-MS/MS é adequado para a determinação na faixa analítica do fármaco para o monitoramento terapêutico, usando amostras secas. O método validado é aplicável para TDM de THD e oferece a possibilidade de obtenção de amostras de locais remotas transportadas em temperatura ambiente preservando a estabilidade da THD para análise em LC-MS/MS. Estudos adicionais prospectivos usando estas metodologias serão necessários para avaliar a aplicabilidade de monitoramento de THD em populações expressivas que utilizem este medicamento

INTRODUCTION: Thalidomide (THD) is an immunomodulatory and anticancer drug; therapeutic drug monitoring (TDM) is crucial for dose adjustment. Dried Plasma Spot (DPS) is an emerging sampling strategy, which can allow access to HPLC-MS/MS analysis even in distant locations. In the present study, we developed and validated a SPE-ultra-HPLC-MS/MS method for quantification of THD in DPS and compared it with wet plasma (WP) samples. METHOD: Plasma dried in DPS devices (200 L) and 100 L of WP were treated with acetonitrile and water for THD extraction, and the extracts were subjected to online solid phase extraction and analyzed on UHPLC-MS/MS. The method was validated for linearity, the limit of detection and quantification, accuracy, precision, matrix effect, process efficiency, carryover, interference study, dilution integrity, and stability. The method was applied to quantify THD in plasma samples from patients with cutaneous lupus erythematosus (CLE) treated with THD, prepared in DPS and WP, and to study the transport of patient samples prepared in DPS. RESULTS: The peak area ratio calibration curve versus THD concentration was linear over the concentration range of 50 to 2000 ng/mL (r2>0.990) for DPS and WP. The method has a limit of detection of 20 ng/mL and a lower limit of quantitation (LLOQ) of 50 ng/mL for THD in DPS and WP. Accuracy and precision resulted in a relative standard error of 1.3% to 8.9%, with a maximum coefficient of variation (CV%) of 18.6% (at LLOQ) and 8.6% at higher concentrations, for DPS and WP. Considering the low and high concentrations for DPS and WP, the matrix effect was 100.6% to 107.0%; recovery ranged from 88.7% to 105.0%, and process efficiency ranged from 91.3% to 109.3%. No carryover, interfering, or dilution effects were observed. THD standard stock solutions were stable at -20°C for 30 days and at -80°C for four months for DPS and WP. Furthermore, DPS samples were stable for 14 days at room temperature and 45°C. The quantification of THD in plasma samples from eight patients with LEC showed median results of 257.1 ng/mL (DPS) and 269.3 ng/mL (WP). Transport between long distances (up to 9 days and 41°C) of patient samples resulted in a concentration decrease not more than 14% for DPS. CONCLUSIONS: The validated method to quantify THD in DPS by UHPLC-MS/MS is suitable for determination in the analytical range of the drug for therapeutic monitoring using dried samples. The validated method is applicable for THD TDM and offers the possibility of obtaining samples from remote locations transported at room temperature, preserving the stability of THD for analysis in LC-MS/MS. Additional prospective studies using these methodologies will be needed to assess the applicability of THD monitoring in significant populations treated with this drug