A leishmaniose tegumentar americana (LTA) pode ser causada por diferentes espécies de Leishmania, podendo haver diferentes manifestações clínicas decorrentes da espécie do parasito envolvido e, da resposta imune do hospedeiro. No Brasil são descritas oito espécies circulantes de Leishmania, principalmente na região norte do país, que podem causar desde forma cutânea localizada até a forma mucosa. Identificar as espécies de Leishmania a partir de amostras de lesão pode contribuir para melhor escolha terapêutica, pois sabidamente diferentes espécies de Leishmania são mais sensíveis a diferentes medicamentos. Ademais, a utilização de técnicas moleculares permite a melhor identificação do parasito, contribuindo não só para definição da espécie como também para identificar espécies que comumente não são descritas como causadoras de determinada forma clínica. Neste trabalho buscamos identificar espécies de Leishmania causadoras de lesão cutânea ou mucosa, utilizando-se amostras de uma corte de pacientes atendidos no Instituto de Infectologia Emilio Ribas. Duzentas e onze amostras de lesão cutânea ou mucosa de pacientes com suspeita clínica de LTA foram submetidas a reação em cadeia da polimerase utilizando-se o gene codificador da proteína do choque térmico de 70kDa (hsp70) e a região do espaçador interno transcrito (ITS1) como alvos para diagnóstico e posteriormente, as amostras positivas, foram submetidas ao polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição e ao sequenciamento pelo método de Sanger para identificação da espécie. Oitenta e quatro amostras amplificaram na PCR para os alvos, confirmando o diagnóstico de LTA, sendo 18 amostras de leishmaniose mucosa (LM), 62 amostras de leishmaniose cutânea localizada (LCL) e 4 de leishmaniose muco-cutânea (LMC). A caracterização da espécie de Leishmania foi melhor obtida utilizando-se a técnica de sequenciamento de Sanger, tendo como gene alvo hsp 70 ou a região ITS-1 com 98,8 % de concordância. Dezoito amostras de LM foram caracterizadas como Leishmania (Viannia) braziliensis. Das 62 amostras de LCL, 56 amostras foram caracterizadas como L. (V.) braziliensis, três foram caracterizadas como L. (L.) amazonensis, três foram caracterizadas como L. (V.) guyanensis, uma caracterizada como L. (L.) infantum. Das 4 amostras de LCM, 3 foram caracterizadas como L. (V.) braziliensis e uma amostra caracterizada como L. (L.) amazonensis. Somente uma amostra de LCL foi identificada como L. (V.) guyanensis / L. (V.) panamensis com o alvo ITS1, sendo identificada como L. (V.) guyanensis pelo gene alvo hsp70. A PCR-RFLP, com gene alvo hsp70, utilizando-se a enzima HaeIII apresentou padrão de restrição característico das espécies identificadas pelo sequenciamento. A PCR-RFLP, tendo como alvo a região ITS1, com a enzima HaeIII, não diferenciou as espécies do subgênero Viannia. Nossos resultados confirmam que L. (V.) braziliensis é a principal espécie causadora de LM no Brasil e que diferentes espécies de Leishmania podem causar LCL, inclusive a L. (L.) infantum

American tegumentary leishmaniasis (ATL) can be caused by different species of Leishmania and there may be different clinical manifestations resulting from the species of parasite involved and the host's immune response. In Brazil, eight species of Leishmania are described, mainly in the Northern region of the country, which can cause from a localized cutaneous form to a mucosal form. Identifying Leishmania species from lesion samples can contribute to a better therapeutic choice, as different Leishmania species are known to be more sensitive to different drugs. Furthermore, the use of molecular techniques favors a better identification of the parasite, contributing not only to defining the species but also to identifying species that are not commonly described as causing a certain clinical form. In this work, we proposed to identify species of Leishmania that cause cutaneous or mucosal lesions, using samples from a group of patients seen at Instituto de Infectologia Emilio Ribas. Two hundred and eleven samples of cutaneous or mucosal lesions from patients with clinical suspicion of ATL were subjected to polymerase chain reaction using the 70kDa heat shock protein coding gene (hsp70) and the transcribed internal spacer region (ITS1) as targets for diagnosis and subsequently, the positive samples were submitted to restriction fragment length polymorphism and sequencing by the Sanger method for species identification. Eighty-four samples amplified in PCR for the targets, confirming the diagnosis of ACL, being 18 samples of mucosal leishmaniasis (ML), 62 samples of localized cutaneous leishmaniasis (LCL) and 4 of mucocutaneous leishmaniasis (MCL). The characterization of the Leishmania species was better obtained using the Sanger sequencing technique, with the target gene hsp 70 or the ITS-1 region with 98.8% agreement. Eighteen LM strains were characterized as Leishmania (Viannia) braziliensis. Of the 62 LCL samples, 56 samples were characterized as L. (V.) braziliensis, three were characterized as L. (L.) amazonensis, three were characterized as L. (V.) guyanensis, one characterized as L. (L.) infantum, of the 4 MCL samples, 3 were characterized as L. (V.) braziliensis and one sample characterized as L. (L.) amazonensis. Only one LCL sample was identified as L. (V.) guyanensis / L. (V.) panamensis with the ITS1 target, being identified as L. (V.) guyanensis by the hsp70 target gene. PCR-RFLP, with the target gene hsp70, using the HaeIII enzyme, showed a restriction pattern characteristic of the species identified by sequencing. PCR-RFLP, targeting the ITS1 region, with the HaeIII enzyme, did not differentiate the species of the subgenus Viannia. Our results confirm that L. (V.) braziliensis is the main specie causing ML in Brazil and that different species of Leishmania can cause LCL, including L. (L.) infantum