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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.5.2023.tde-27062023-121527
Documento
Autor
Nome completo
Victor Angelo Folgosi
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2022
Orientador
Banca examinadora
Casseb, Jorge Simão do Rosário (Presidente)
Gonçalves, Fernanda de Toledo
Komninakis, Shirley Vasconcelos
Silva, Bosco Christiano Maciel da
Título em português
Desenvolvimento de peptídeos sintéticos para o diagnóstico sorológico da infecção ocasionada pelos vírus linfotrópicos de células T humanas tipo 1 e 2 (HTLV-1 e 2)
Palavras-chave em português
Diagnóstico
Ensaio de imunoadsorção enzimática
Peptídeos
Testes imediatos
Western Blotting
Resumo em português
Introdução: As proteínas codificadas pelos genes gag (p24 e p19) e env (gp21 e gp46) do HTLV, apresentam um papel fundamental durante a resposta imune celular primária dos indivíduos infectados. Neste contexto é essencial o desenvolvimento de painéis de peptídeos sintéticos a partir de regiões específicas destas proteínas, levando a elaboração de tecnologias diagnósticas descentralizadas e de baixo custo Point of Care". Objetivo: O objetivo deste estudo foi identificar peptídeos sintéticos para serem utilizados no diagnóstico do HTLV. Métodos: Para diferenciação de reatividade e seleção das proteínas virais que serviram como base para o desenho dos peptídeos, realizamos uma análise de reatividade média dentre as proteínas utilizadas no Western Blot (HTLV Blot 2.4®, MP Biomedicals). Em seguida, foram localizadas regiões de alta similaridade destas proteínas utilizando o BLASTp e o software MEGA-X, incluindo sequências de diferentes grupos étnicos e geográficos. A partir destas regiões, a predição dos epítopos foi elaborada por meio de ferramentas de bioinformática (in sílico), com posterior avaliação de reatividade por ELISA indireto (in vitro). Resultados: Foram desenhados nove peptídeos para HTLV-1, três para HTLV-2 e dois para HTLV-1/2. Contudo, apenas dois peptídeos obtiveram valores consideráveis de sensibilidade e especificidade, e apenas para o HTLV-1. O peptídeo 1 apresentou 43,62% de sensibilidade e 100% de especificidade, enquanto o peptídeo 2 apresentou 36% de sensibilidade e 100% de especificidade. Conclusão: Embora os peptídeos não tenham apresentado parâmetros elevados de sensibilidade, os valores de corte podem ser aumentados para melhorar sua eficácia. Além disso, estes peptídeos apresentaram valores de alta especificidade, o que em suma, permite sua utilização no formato de pool ou até mesmo como uma proteína recombinante. Outros experimentos usando esses peptídeos somados a outros desenvolvidos e difundidos na literatura, podem ser realizados para o desenvolvimento de testes altamente sensíveis e específicos, de baixo custo e que possam ser utilizados de forma Point of Care
Título em inglês
Development of synthetic peptides for the serological diagnosis of infection caused by human T-cell lymphotropic viruses type 1 and 2 (HTLV-1 and 2)
Palavras-chave em inglês
Diagnosis
Enzyme-linked immunosorbent assay
Peptides
Point of care
Western Blotting
Resumo em inglês
Introduction: The proteins encoded by the HTLV gag (p24 and p19) and env (gp21 and gp46) genes play a key role during the primary cellular immune response of infected individuals. In this context, it is essential to develop panels of synthetic peptides from specific protein regions, leading to the development of decentralized and low-cost Point of Care diagnostic technologies. Objective: The aim of this study was to identify synthetic peptides to be used in the diagnosis of HTLV. Methods: In order to differentiate the reactivity and select the viral proteins that served as the basis for the design of the peptides, we performed an average reactivity analysis among the proteins used in the Western Blot (HTLV Blot 2.4®, MP Biomedicals). Then, regions of high similarity of these proteins were located using BLASTp and the MEGA-X software, including sequences from different ethnic and geographic groups. From these regions, the prediction of epitopes was elaborated using bioinformatics tools (in silico), with subsequent evaluation of reactivity by indirect ELISA (in vitro). Results: Nine peptides were designed for HTLV-1, three for HTLV-2 and two for HTLV-1/2. However, only two peptides achieved considerable values of sensitivity and specificity, and only for HTLV-1. Peptide 1 showed 43.62% sensitivity and 100% specificity, while peptide 2 showed 36% sensitivity and 100% specificity. Conclusion: Although the peptides did not show high sensitivity parameters, the cutoff values can be increased to improve their effectiveness. In addition, these peptides showed high specificity values, which in short, allows their use in pool format or even as a recombinant protein. Other experiments using these peptides, added to others developed and disseminated in the literature, can be carried out for the development of highly sensitive and specific, low-cost tests that can be used in a Point of Care way
 
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Data de Publicação
2023-07-04
 
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