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Tesis Doctoral
DOI
https://doi.org/10.11606/T.5.2022.tde-14042023-153906
Documento
Autor
Nombre completo
Adriana Borba Guimarães
Dirección Electrónica
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
São Paulo, 2022
Director
Tribunal
Sanches Junior, Jose Antonio (Presidente)
Miyashiro, Denis Ricardo
Cassia, Flávia de Freire
Festa Neto, Cyro
Título en portugués
Análise dos rearranjos gênicos de cadeias pesada e leves da imunoglobulina pela técnica de reação em cadeia da polimerase no auxílio diagnóstico de processos linfoproliferativos cutâneos de células B
Palabras clave en portugués
Cadeias leves de imunoglobulina
Cadeias pesadas de imunoglobulinas
Linfoma de células B
Pseudolinfoma
Reação em cadeia de polimerase
Rearranjo gênico
Resumen en portugués
Processos linfoproliferativos cutâneos de células B (PLPCB) incluem pseudolinfomas, proliferações linfoides atípicas e linfomas. Os linfomas cutâneos primários de células B (LCPCB) representam aproximadamente 20-25% de todos os linfomas cutâneos primários. Pseudolinfoma (PLC) é uma lesão de pele benigna, que se assemelha, em sua forma clínica e/ou histológica aos linfomas cutâneos. O diagnóstico diferencial entre o PLC e LCPCB pode ser muito difícil. A pesquisa dos rearranjos gênicos das cadeias pesada (IgH) e leves kappa (IgK) e lambda (IgL) da imunoglobulina (Ig) através da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR), tem sido utilizada como método auxiliar no diagnóstico dos LCPCB. Objetivos principais: avaliar a aplicabilidade da técnica de PCR (baseada no protocolo EuroClonality/BIOMED-2) para pesquisa de clonalidade através da análise dos rearranjos gênicos das cadeias pesada e leves de Ig em material proveniente de biópsias cutâneas de pacientes acompanhados no Ambulatório de Linfomas Cutâneos do HCFMUSP que tiveram diagnóstico de PLPCB (PLC, LCPCB ou indefinição diagnóstica entre ambos). Objetivos secundários: avaliar o auxílio diagnóstico do estudo de rearranjo gênico de Ig por PCR nos casos de PLPCB com indefinição diagnóstica. Identificar a contribuição do protocolo de investigação diagnóstica (PID) e algoritmo propostos para a conclusão diagnóstica final e definição de conduta de casos de PLPCB com dificuldade diagnóstica. Métodos: Os pacientes foram submetidos ao PID através de avaliação dos critérios clínicos-evolutivos (CE), histopatológicos associado a imuno-histoquímicos (HP+IHQ) e pesquisa de clonalidade pela análise do rearranjo gênico da Ig por PCR. Os resultados dos critérios foram associados à escala de pontuações. Resultados: Na pesquisa de clonalidade do rearranjo gênico da cadeia pesada, observou-se monoclonalidade em 57,1% (20/35) dos casos avaliados. Na avaliação da clonalidade do rearranjo gênico das cadeias leves, observou-se monoclonalidade em 51,4% (18/35) dos casos avaliados. Nos resultados finais dos critérios avaliados no PID referente aos casos estudados, observou-se casos compatíveis com linfomas cutâneos em 32,4% (11/34) pelo critério CE, 62,9% (22/35) de casos compatíveis com linfomas cutâneos pela avaliação HP+IHQ e resultados monoclonais por estudo de rearranjo gênico de Ig em 77,1% (27/35) dos casos. Observou-se significância estatística na associação entre o grau de suspeição clínica-evolutiva e o resultado histopatológico-imunohistoquímico (p=0.021) pelo teste do qui-quadrado e teste exato de Fisher. Ao se considerar possibilidade da clonalidade por PCR no estudo do rearranjo gênico como método padrão-ouro na diferenciação entre processo linfoproliferativo maligno e benigno, foram calculados valor ideal de corte da pontuação final dos escores do PID igual a 4, com sensibilidade de 100% e especificidade de 33,33 % (pelo índice de Youden). A melhor especificidade foi determinada a partir da pontuação 9 (sensibilidade de 38,5% e especificidade de 100%). A acurácia da pontuação final foi de 80,13% (através da curva ROC). Conclusões: o presente estudo possibilitou o auxílio diagnóstico de casos de PLPCB através do estudo de rearranjo gênico de Ig por PCR na associação com critérios clínico-evolutivos, histopatológicos e imunohistoquímicos. O PID permitiu a realização de um algoritmo de conclusão diagnóstica final e conduta de casos de PLPCB com dificuldade diagnóstica. Os resultados do PID possibilitou a avaliação de diferenciação entre processo linfoproliferativo maligno e benigno através de valor ideal de corte da pontuação final dos escores com adequada especificidade e acurácia
Título en inglés
Analysis of clonal immunoglobulin chain gene rearrangement by thetechnique of polymerase chain reaction (PCR) to aid in the diagnosis of cutaneous B-cell lymphoproliferative processes
Palabras clave en inglés
B-cell lymphoma
Gene rearrangement
Immunoglobulin Heavy Chains
Immunoglobulin Light Chains
Polymerase Chain Reaction
Pseudolymphoma
Resumen en inglés
B-cell cutaneous lymphoproliferative processes (PLPCB) include pseudolymphomas, atypical lymphoid proliferations and lymphomas. Primary cutaneous B-cell lymphomas (LCPCB) are approximately 20-25% of all primary cutaneous lymphomas. Pseudolymphoma (PLC) is a lymphomatous skin lesion mimicking lymphomas. The differential diagnosis between PLC and LCPCB can be very difficult. The research for gene rearrangement of the heavy (IgH) and kappa (IgK) and lambda (IgL) light chains of immunoglobulin (Ig) through the polymerase chain reaction (PCR) technique has been used as an auxiliary method in the diagnosis of LCPCB. Main objectives: to evaluate the applicability of the PCR technique (based on the EuroClonality/BIOMED-2 protocol) for B-cell clonality research through the gene rearrangement of Ig heavy and light chains in material from skin biopsies of patients followed by diagnostic of PLPCB (PLC, LCPCB or uncertainty between them). Secondary objectives: evaluation of the diagnostic aid of analysis of the Ig gene rearrangement by PCR in cases of PLPCB with diagnostic uncertainty. To identify the contribution of the diagnostic investigation protocol (PID) proposed for the final diagnostic conclusion and definition of the management of cases of PLPCB with diagnostic difficulties. Methods: The patients were submitted with PID through the evaluation of clinical-evolutionary (CE), histopathological criteria associated with immunohistochemical (HP + IHQ) and analysis of the Ig gene rearrangement by PCR. The results of the criteria were associated with the scale of scores. Results: In the clonality research of the IgH gene rearrangement, monoclonality was observed in 57,1% (20/35) of the evaluated cases. In the evaluation of the clonality of the light chain gene rearrangement, monoclonality was observed in 51,4% (18/35) of the cases evaluated. In the final results of the criteria evaluated in the PID for the cases studied, compatible cases of cutaneous lymphomas were observed in 32,4% (11/34) by the CE criteria, 62.9% (22/35) of cases compatible with cutaneous lymphomas by HP+IHC assessment and monoclonal results by Ig gene rearrangement study in 77.1% (27/35) of cases. There was statistical significance in the association between the clinical-evolutionary suspicion and the histopathologicalimmunohistochemical result (p=0.021) by the chi-square test and Fisher's exact test. When considering PCR clonality in the study of gene rearrangement as the gold standard method at PID for differentiating between malignant and benign lymphoproliferative processes, the optimal cut-off value of the final PID score equal to 4 was calculated, with 100% sensitivity and specificity of 33,33 % (by the Youden index). The best specificity was determined from the score 9 (sensitivity of 38.5% and specificity of 100%). The accuracy of the final score was 80,13% (by ROC curve). Conclusions: the present study made it possible to help diagnose cases of PLPCB through the study of gene rearrangement of Ig by PCR in association with clinical-evolutionary, histopathological and immunohistochemical criteria. The PID allowed for an organization chart to conclude the diagnosis and management cases of PLPCB with diagnostic difficulties. The PID results made it possible to assess the differentiation between malignant and benign lymphoproliferative processes through the ideal cut-off value of the final score, with adequate specificity and accuracy
 
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Fecha de Publicación
2023-05-05
 
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