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Thèse de Doctorat
DOI
https://doi.org/10.11606/T.5.2021.tde-28102021-135707
Document
Auteur
Nom complet
Ariene Murari Soares de Pinho
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2021
Directeur
Jury
Otoch, Jose Pinhata (Président)
Pinto Neto, Nelson Inacio
Almeida, Danilo Cândido de
Tokeshi, Flavio
Titre en portugais
Análise das células-tronco mesenquimais do tecido adiposo e seu potencial adipogênico em pacientes com caquexia associada ao câncer 
Mots-clés en portugais
Adipogênese
Caquexia
Células-tronco mesenquimais
Inflamação
Neoplasias
Tecido adiposo
Resumé en portugais
A caquexia associada ao câncer é uma síndrome multifatorial relacionada à perda de tecido adiposo, massa muscular esquelética e alterações metabólicas diversas. Nosso grupo tem demonstrado que o tecido adiposo é um importante contribuinte na etiologia da inflamação sistêmica, pela secreção ativa de fatores inflamatórios e aumento da taxa metabólica basal. Os adipócitos são originados a partir da diferenciação das células-tronco mesenquimais (MSCs), que além do potencial adipogênico são consideradas também imunomoduladoras. O objetivo deste trabalho foi analisar as MSCs do tecido adiposo de pacientes com câncer gastrointestinal com e sem caquexia, quanto ao seu potencial adipogênico e inflamatório na síndrome de caquexia. O estudo incluiu 64 pacientes divididos em três grupos: pacientes submetidos à cirurgia para remoção de hérnia abdominal ou colecistitectomia (controles), pacientes com câncer e peso estável (WSC), e pacientes com câncer e caquexia (CC). Durante o ato cirúrgico foram coletadas biópsias do tecido adiposo subcutâneo e visceral próximo ao tumor, utilizadas para avaliação da expressão de genes termogênicos e adipogênicos, e para obtenção das MSCs, que após isoladas, foram cultivadas sob três condições de cultivo: meio com soro fetal bovino (SFB) e com os estímulos pró-inflamatórios IL6 ou TNFa, para análise de expressão gênica e das citocinas pró-inflamatórias secretadas em meio de cultura. Após dissociação do tecido adiposo subcutâneo, os pacientes do grupo CC apresentaram menor número de células viáveis da fração vascular estromal, comparados ao grupo WSC (p < 0,012). Não houve diferença no número das células obtidas do TAPT entre os grupos. O potencial proliferativo das MSCs sob os diferentes estímulos não apresentou diferença entre os grupos, e a apoptose nas células estimuladas com IL6 foi maior no grupo Controle comparado aos grupos WSC e CC (p < 0,0001). A estimulação com TNFa aumentou significativamente a expressão dos genes HIF1a, TFAM, NFkB-p50 e NFkB-p65 em comparação às outras condições de cultivo (SFB ou IL6). O estímulo do TNFa induziu aumento de concentração de citocinas MCP1, IL6 e IL8 presentes no meio de cultura em comparação às células cultivadas com SFB ou IL6, em WSC e CC. A correlação entre as citocinas secretadas pelas MSCs foi positiva (p < 0,05), e a expressão proteica das citocinas IL6, IL8 e VEGF apresentou correlação negativa com aquela dos genes NFkB-p50 e NFkB-p65. Análise por Componente Principal (PCA) confirmou que a resposta ao estímulo TNFa em ambos os grupos câncer difere das demais condições de cultivo. Nossos resultados demonstram que o TNFa estimula a produção de fatores inflamatórios nas MSCs de pacientes com câncer com e sem caquexia, e esta citocina parece contribuir para o papel das MSCs do tecido adiposo na manutenção de um ambiente inflamatório relacionado à caquexia
Titre en anglais
Evaluation of mesenchymal stem cells adipogenic potential in patients with cancer-associated cachexia
Mots-clés en anglais
Adipogenesis
Adipose tissue
Cachexia
Inflammation
Mesenchymal stem cells
Neoplasms
Resumé en anglais
Cancer-associated cachexia is a multifactorial syndrome related to the loss of adipose tissue, skeletal muscle mass, and various metabolic changes. Our group has demonstrated that adipose tissue is an important player in the etiology of systemic inflammation, contributing to the significant increase in the amount of circulating inflammatory factors and potentially, to increase d metabolic rate. Adipocytes originate from the differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs), which, in addition to adipogenic potential, are also considered immunomodulatory. Our objective was to analyze MSCs from the white adipose tissue of patients with gastrointestinal cancer with and without cachexia, regarding their adipogenic and inflammatory potential. The study included 64 patients divided into three groups: patients after surgery to remove abdominal hernia or after cholecystectomy (control), cancer patients with stable weight (WSC), or cachexia (CC). During surgery, biopsies of subcutaneous and visceral peritumoral adipose tissue were collected and used to evaluate the expression of thermogenic and adipogenic genes, as well as employed to obtain the MSCs. The latter were cultured without (fetal bovine serum-SFB) and with the pro-inflammatory stimuli IL6 and TNFa, for analysis of gene expression and pro-inflammatory cytokines secreted in the culture medium. After dissociation of the subcutaneous adipose tissue, patients in the CC cell group showed fewer stromal vascular fraction cells compared to WSC (p < 0,012); there was no difference in the number of TAPT-derived cells. The evaluation of the proliferative potential of MSCs under different stimuli did not show any difference among the groups, and the percentage of apoptotic was higher for those stimulated with IL6 in the Control group, compared to WSC and CC (p < 0,0001). Cells stimulated with TNFa increased the expression of HIF1a, TFAM, NFkB-p50 and NFkB-p65 genes, compared to other culture conditions (SFB or IL6), for which there was no difference among groups. TNFa stimulation increased the concentration of cytokines MCP1, IL6 and IL8 present in the culture medium compared to cells cultured with SFB or IL6, in WSC and CC. The correlation between the cytokines secreted by MSCs was positive (p < 0,05), and the cytokines IL6, IL8 and VEGF showed negative correlation with the expression of the NFkB-p50 and NFkB-p65 genes. Principal Component Analysis (PCA) confirmed that the response to TNF in both groups with cancer differs from the other incubation conditions. Our results demonstrate that TNFa stimulates the production of inflammatory factors in MSCs of cancer patients with and without cachexia, and this cytokine seems to contribute to the adipose tissue MSCs role in maintaining an inflammatory environment related to cachexia
 
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Date de Publication
2021-10-28
 
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