O exossomo é um complexo multiproteico envolvido em processamento e degradação de vários tipos de RNA em eucariotos. Este complexo está presente tanto no núcleo quanto no citoplasma da levedura. O complexo exossomo possui duas subunidades catalíticas: Rrp6, a qual é exclusivamente nuclear; e Rrp44, que possui domínios endonucleolítico e exonucleolítico, sendo essencial para a sobrevivência da célula. O objetivo do presente trabalho foi analisar a localização do complexo exossomo e as vias de transporte de suas subunidades para o núcleo celular, com foco na subunidade Rrp44. Para tal, a principal técnica empregada neste trabalho foi a microscopia de fluorescência, através da qual foram feitas análises utilizando-se diversas cepas mutantes e fusões proteicas com GFP e com mCherry. Os resultados apresentados mostram uma localização subnucleolar do complexo exossomo quando suas subunidades são expressas em níveis endógenos, sob controle dos seus próprios promotores, em fusão com GFP. As subunidades Rrp6 e Rrp44 localizam-se no núcleo mesmo quando superexpressas. Já outras subunidades do complexo, como Rrp41 e Rrp43, apresentam forte sinal citoplasmático na mesma condição de expressão. Ademais, pudemos identificar os possíveis sinais de localização nuclear da subunidade Rrp44, reconhecidos pelas carioferinas essenciais Srp1 e Kap95,responsáveis pelo transporte nuclear de Rrp44. Os resultados obtidos neste trabalho mostram que o exossomo de levedura está principalmente localizado no núcleo e concentrado no nucléolo, o que tem grande importância no estudo funcional deste complexo.

Exosome is a multiprotein complex responsible for processing and degradation of many classes of RNAs in eukaryotic cells. This complex localizes both to the nucleus and cytoplasm. Exosome complex has two catalytic subunits: Rrp6, which is exclusively nuclear; and Rrp44, that has endonucleolitic and exonucleolitic domains, being essential for cell growth. The aim of this project was to analyze the localization of the exosome and the nuclear transport pathways of its subunits, focusing on Rrp44. For that, the main technique used was fluorescent microscopy, which allowed the analysis in several different strains and protein fusions with GFP and mCherry. The results show a subnucleolar localization of the exosome complex when its subunits are expressed at endogenous levels, under control of their own promoters, fused to GFP. Interestingly, the subunits Rrp6 and Rrp44 still localize to the nucleus when overexpressed, whereas other exosome subunits, such as Rrp41 and Rrp43 show strong signals in the cytoplasm when they are overexpressed in the same conditions. Moreover, we could identify the putative nuclear localization signals of Rrp44, which are recognized by the essential karyopherins Srp1 and Kap95, the main karyopherins affecting the nuclear transport of Rrp44. The results of this work show that the yeast exosome is mainly localized to the nucleus and concentrated in the nucleolus, which is particularly important for the functional study of this complex.