As linhagens celulares ST1 e P7 (ARMELIN e ARMELIN, 1983), isoladas no laboratório a partir da linhagem C6 de glioma de rato, constituem modelos interessantes para o estudo da ação de glicocorticóides por mostrarem, respectivamente, hiperesponsividade e resistência ao tratamento com o hormônio quando observados morfologia, tempo de dobramento, densidade de saturação, crescimento em suspensão de agarose e tumorigenicidade em camundongos "nude". Em trabalhos anteriores, foram isoladas de bibliotecas de cDNA de células ST1, através de hibridização diferencial, seqüências correspondentes a metalotioneína 1, metalotioneína 2, glicoproteína α-1 ácida e pelo menos um transcrito de um retrovírus endógeno (clones C27, C36, C4 l e CV2, respectivamente) (VALENTINI e ARMELIN, 1996). Para comprovar o envolvimento das proteínas Metalotioneína 1, Metalotioneína 2, Glicoproteína α-1-ácida e env na reversão fenotípica observada nas células ST1 tratadas com hidrocortisona, duas abordagens diferentes foram usadas: a inibição da expressão dessas proteínas com oligonucleotídeos ou construções "antisense" e a super-expressão dessas proteínas usando vetores de expressão induzíveis. Nos ensaios de crescimento em suspensão de agarose, levados a cabo com populações de células transfectadas com construções induzíveis contendo os cDNAs de interesse nas orientações "sense" ou "antisense", o padrão de crescimento das células transfectadas, na ausência ou na presença de hidrocortisona e/ou indutor permitiu confirmar o possível papel das proteínas correspondentes na reversão fenotípica induzida por hidrocortisona. Os resultados mostraram que transcritos "antisense" de glicoproteína α-1-ácida, metalotioneína 2, metalotioneína 1 e env foram capazes de inibir, em maior ou menor grau, o efeito de hidrocortisona em células ST1 transfectadas. Por outro lado, a indução da expressão de Metalotioneína 1 e env foram capazes de inibir, parcialmente, a formação de colônias em células ST1 e P7 transfectadas com construções "sense".

ST1 and P7 cells, isolated in the laboratory from the C6 rat glioma cell line (ARMELIN and ARMELIN, 1983), constitute interesting models for the study of glucocorticoids action showing, respectively, sensibility and resistance to the hormone when observed morphology, doubling time, saturation density, growth in agarose suspension and tumorigenicity in nude mice. ln a previous work, ESTs sequences corresponding to metallothionein 1, metallothionein 2, α-1-acid glycoprotein and the env gene of a endogenous retrovirus were isolated (VALENTINI and ARMELIN, 1996). To prove the involvement of metallothioneins 1 and 2, α-1-acid glycoprotein and env in the observed phenotypical reversion in ST1 cells dealt with hydrocortisone, two different approaches had been used: the inhibition of the expression of these proteins with antisense cDNA constructs and the overexpression of these proteins using inducible vectors. In agarose suspension growth assay, performed with populations of cells transfected with inducible constructs carring the cDNAs in sense and antisense orientations, the growth of the transfected cells, in the absense or the presence of hydrocortisone and / or inducer allowed us to confirm the role of the corresponding proteins in the hydrocortisone-induced phenotypic reversion. The results showed that antisensa transcripts of α-1-acid glycoprotein, metallothionein 2, metallothionein 1 and env inhibited, in greater or minar degree, the effect of hydrocortisone in transfected ST1 cells. On the other hand, induction of Metallothionein 1 and env expression was able to inhibit, partially, the formation of colonies from ST1 and P7 cells transfected with sense constructs.