O fator esteroidogênico 1 (SF1/NR5A1) e o receptor homólogo de fígado (LRH1/NR5A2) são fatores de transcrição importantes na regulação da esteroidogênese, nas adrenais e nas gônadas, respectivamente. SF1/NR5A1 e LRH1/NR5A2 podem ser regulados por vários fatores, dentre eles o fator de transcrição do tipo bHLH, TCF21. TCF21 é capaz de inibir a expressão endógena de SF1/NR5A1 e das enzimas esteroidogênicas através da ligação no sítio E-box do promotor de SF1/NR5A1 de culturas de células de carcinomas adrenocorticais humanos e culturas normais de adrenais de rato. No entanto, em células de hepatocarcinomas, TCF21 promove o aumento da expressão gênica de LRH1/NR5A2 através da ligação na região promotora de SHP, um regulador negativo de LRH1. TCF21 está menos expresso em tumores carcinomas adrenocorticais do que em adenomas. Além disso, a expressão combinada dos genes TCF21-BUB1B e TCF21-SF1 tem valor de prognóstico, respectivamente, em tumores adrenocorticais de pacientes adultos e pediátricos. Em conjunto, esses dados sugerem que TCF21 pode ter um amplo papel como regulador da transcrição em células tumorais. Nesse estudo tivemos como hipótese que a identificação de outros alvos controlados por TCF21 poderiam contribuir no entendimento do seu papel e importância nas células tumorais. Foi utilizado o método de ChIP-Seq para identificação de prováveis 70 sequencias-alvo de TCF21 em células modificadas para superexpressar TCF21 em linhagem de células de carcinoma adrenocortical, células H295R pCMVMycTCF21. As cinco sequencias mais frequentes identificadas foram as dos genes PRDM7, CNTNAP2, CACNA1B, PTPRN2 e KCNE1B. Resultados para validação por qRT-PCR mostraram que TCF21 regula positivamente a expressão de PRDM7 e CNTNAP2 e negativamente a expressão de CACNA1B. Em carcinomas adultos e pediátricos a expressão de CACNA1B, que codifica para o canal de cálcio Ca v2.2, está mais elevada em comparação aos adenomas. No entanto, esse aumento não está relacionado com a sobrevida geral em tumores adultos. Além disso, o bloqueio seletivo de Ca v2.2 em células H295R e em células de carcinoma adrenocortical adulto, ACC-T227, não alterou a viabilidade celular. A falta de relação com sobrevida geral e a manutenção da viabilidade celular após bloqueio de Ca v2.2 sugere que pode haver um efeito ainda não detectado do controle de TCF21 sobre Ca v2.2 e canais de cálcio em tumores adrenocorticais. A análise da relação dos alvos de TCF21 observadas nas amostras de hepatocarcinoma de pacientes, utilizando os dados do The Cancer Genome Atlas Program (TCGA) e validação em células HepG2, mostraram que TCF21 diminui a expressão genica de ATP10A e aumenta da expressão de PTPRN2 in vitro. Nossos resultados sugerem que a expressão de CACNA1B / canal Ca v2.2 pode ter valor diferencial e ser importante na tumorigênese adrenocortical em pacientes adultos e pediátricos, mas novas abordagens e estudos são necessários.

Steroidogenic factor 1 (SF1/NR5A1) and homologous liver receptor (LRH1/ NR5A2) are important transcription factors in the regulation of steroidogenesis, adrenals and gonads, respectively. SF1/NR5A1 and LRH1/NR5A2 can be regulated by some factors, among them is the bHLH type transcription factor, TCF21. TCF21 is able to inhibit the endogenous expression of SF1/NR5A1 and steroidogenic enzymes by binding to the E-box site of the SF1/NR5A1 promoter from human adrenocortical carcinoma cell cultures and normal rat adrenal cultures. However, in hepatocarcinoma cells TCF21 promotes increased LRH1 / NR5A2 gene expression by binding to the SHP promoter region, a negative regulator of LRH1. TCF21 is less expressed in adrenocortical carcinoma tumors than in adenomas. In addition, the combined gene expression of TCF21-BUB1B and TCF21-SF1 have prognostic value in adrenocortical tumors of adult and pediatric patients, respectively. Taken together, these data suggest that TCF21 may have a comprehensive role as a regulator of transcription in tumor cells. In this study, we hypothesized that the identification of other targets controlled by TCF21 could contribute to the understanding of their role and importance in tumor cells. The ChIP-Seq method was used to identify 70 target sequences of TCF21 in cells modified to overexpress TCF21 in adrenocortical carcinoma cell line, H295R pCMVMycTCF21 cells. The five most frequent sequences identified were PRDM7, CNTNAP2, CACNA1B, PTPRN2 and KCNE1B genes. Results for qRT-PCR validation showed that TCF21 regulates positively the PRDM7 and CNTNAP2 expression and negatively the CACNA1B expression. In adult and pediatric patients, CACNA1B expression, which codes for the calcium channel Ca v2.2, is higher in carcinomas than in adenomas. However, this increase is not related to overall survival in adult tumors. In addition, selective Ca v2.2 blocking in H295R cells and adult adrenocortical carcinoma cells, ACC-T227, did not alter cell viability. The lack of relationship with overall survival and maintenance of cell viability after Ca v2.2 block suggests that there may be an undetected effect of TCF21 control on Ca v2.2 in adrenocortical tumors. Analysis of the relationship of TCF21 targets observed in hepatocarcinoma samples from patients, using data from The Cancer Genome Atlas Program (TCGA) and validation in HepG2 cells, showed that TCF21 decreases ATP10A gene expression and increases PTPRN2 gene expression in vitro. Our results suggest that the expression of CACNA1B / Ca v2.2 channel may have a differential value and be important in adrenocortical tumorigenesis in adult and pediatric patients, but new approaches and studies are needed.