Introdução e objetivos: O consumo crônico de dieta hiperlipídica (HFD) provoca obesidade e causa inflamação sistêmica. No intestino grosso, a HFD promove inflamação e, em paralelo, diminui o conteúdo de proteínas de junção de oclusão (claudina 1 e ocludina), tornando o epitélio intestinal mais permeável aos produtos bacterianos, o que pode contribuir com a instalação da inflamação sistêmica. No intestino delgado, local de maior absorção dos componentes da dieta, a HFD promove redução da maioria dos transportadores de nutrientes, o que indica que o excesso de gordura na dieta afeta, também, o intestino delgado. Entretanto, não sabemos se a HFD promove uma inflamação local ou se afeta a expressão das proteínas de oclusão, o que comprometeria a integridade da barreira intestinal. Adicionalmente, os hormônios tireoidianos (HTs), em especial o T3, exercem efeitos de supressão da inflamação, o que pode contribuir para a integridade da barreira. Sendo assim, o nosso interesse é avaliar a expressão das proteínas de junção no intestino delgado de animais eu, hipo e hipertireoideos alimentados com HFD. Material e métodos: Para este estudo, utilizamos camundongos machos adultos da cepa C57BL-6 que, a partir dos dois meses de idade, foram distribuídos em dois grupos experimentais: alimentados com dieta padrão (LFD) ou com dieta hiperlipídica (HFD). No final de 12 semanas, momento em que os animais estavam obesos, os animais receberam salina, T3 ou PTU por via subcutânea durante 30 dias consecutivos. No final do tratamento, os animais foram submetidos à eutanásia, o intestino removido e o epitélio separado da mucosa para análise da expressão gênica (mRNA) e do conteúdo proteico das proteínas de junção, por PCR em tempo real e western blotting, respectivamente. Resultados: Considerando a diversidade de proteínas de junção no epitélio do intestino delgado, optamos por avaliar a expressão gênica dessas proteínas apenas nos grupos dieta padrão e HFD para, a partir daí, avaliar o conteúdo proteico apenas para aquelas cujo mRNA foi alterado pela HFD. Nesse caso, foram avaliados os seguintes mRNAs: ZO-1, ZO-2, ZO-3, JAM-1, JAM-2, JAM-4, claudina 3, claudina 7, claudina 12, claudina 15 e ocludina (todos expressos no intestino delgado). Observamos que na condição de ingestão de HFD houve uma redução dos mRNAs de ZO-2 (p = 0,06), claudina 12 (p = 0,07) e ocludina (p = 0,05), com valor de p próximo do considerado estatístico. Com base nesses achados, realizamos a análise de western blotting para ZO-2, claudina 12 e ocludina nos animais alimentados com dieta padrão e HFD tratados com salina, T3 e PTU. Observamos aumento do conteúdo da ocludina e da ZO-2 (apesar da redução do mRNA) nos animais alimentados com HFD, sem alteração do conteúdo proteico da claudina 12. O hipotireoidismo e o hipertireoidismo não afetaram o conteúdo das proteínas. O hipertireoidismo foi confirmado por redução do mRNA do Tshb, aumento da ingestão alimentar, hipertrofia cardíaca e redução da gordura perigonadal. Já o hipotireoidismo foi confirmado pelo aumento da expressão do gene do Tshb. Conclusão: Apesar do conteúdo reduzido do mRNA da ZO-2 e da ocludina, observamos aumento dessas duas proteínas no intestino delgado, possivelmente, por uma maior recrutamento desses mRNA para a síntese proteica. Dado a importância dessas proteínas para a adesão célula célula, os nossos resultados sugerem que há uma possível diminuição da permeabilidade intestinal frente à ingestão de HFD, tornando o epitélio do intestino delgado menos frouxo.

Introduction and aim: Chronic consumption of high-fat diet (HFD) promotes obesity and induces low-grade systemic inflammation. In the large intestine, HFD promotes inflammation as well as decrease tight junctions proteins (claudin 1 and occludin), leading the intestinal epithelium to be more permeable for bacterial products or antigenic compounds, which could contribute to the onset of systemic inflammation. In the small intestine, the main absorption site for dietary components, HFD promotes a reduction of the most nutrient transporters, indicating that HFD also affects the small intestine as well. However, we do not know whether HFD promotes small intestine inflammation or affects tight junction proteins expression, both conditions that might damage the intestinal barrier. Additionally, thyroid hormones (THs), especially T3, exert anti-inflammation effects, and, for this reason, might contribute to intestinal barrier integrity. Therefore, we were interested in evaluate the tight junction proteins expression in the small intestine of hypo and hyperthyroid mice feeding HFD. Methods: For this study, adult male C57BL/6 mice were chosen and distributed into two experimental groups: standard diet (LFD) or high-fat diet (HFD). After 12 weeks feeding HFD, mice were obese and they received subcutaneous injection of saline, T3 or PTU up to 30 days. At the end of treatment, mice were euthanized, intestines were removed and epithelium was separated from the mucosa to analysis tight junction gene expression (mRNA) and protein content by real-time PCR and western blotting, respectively. Results: Taking account of tight junction proteins diversity in the small intestine we, firstly, evaluate gene expression and according to the results we selected the proteins to be evaluated by western blotting. In this sense, the following mRNAs were evaluated: ZO-1, ZO-2, ZO-3, JAM-1, JAM-2, JAM-4, claudin 3, claudin 7, claudin 12, claudin 15 and occludin (all expressed in small intestine). We observed that HFD intake promoted a reduction of ZO-2 (p = 0.06), claudin 12 (p = 0.07) and occludin (p = 0.05) mRNAs, with p value close to be considered statistical. Based on these findings, we performed protein analysis by western blotting for ZO-2, claudin 12 and occludin in the small intestine of mice feeding LFD and HFD both treated with saline, T3 and PTU. We observed an increasing of occludin and ZO-2 amount (despite of reduction of their mRNAs) in HFD-group without altering claudin 12 content. Hypothyroidism or hyperthyroidism did not affect these three protein content. Hyperthyroidism effectiveness was confirmed by: Tshb mRNA and perigonadal fat reduction, increased food intake and cardiac hypertrophy while hypothyroidism was confirmed by increased Tshb gene expression. Conclusion: Despite of the decreasing of ZO-2 and occludin mRNAs their proteins content increased in the small intestine of HFD-group, perhaps, due to a higher recruitment of mRNAs to protein synthesis. Considering the importance of these proteins (ZO-2 and occludin) for cell - cell adhesion, our findings lead us to suggest a possible decrease of intestinal permeability in HFD-group, leading the epithelium to be less leaked than LFD-group.