A obesidade é uma condição crônica caracterizada pelo excesso de tecido adiposo branco e por uma inflamação sistêmica de baixo grau. A Na,K-ATPase é uma proteína eletrogênica, essencial para a manutenção do potencial elétrico de células excitáveis, e a sua participação na neuroinflamação já foi relatada por diversos autores. O cerebelo, por sua vez, apresenta uma maior susceptibilidade aos danos oxidativos, em virtude do menor conteúdo de compostos antioxidantes. O presente trabalho teve por objetivo avaliar as consequências da obesidade sobre a atividade da Na,K-ATPase, no cerebelo de camundongos fêmeas. Camundongos Balb/c fêmeas receberam ração convencional ou hiperlipídica, durante 10 semanas. Ao longo deste período, os animais foram avaliados quanto ao ganho de peso, de massa muscular e massa gorda corporais. Ao fim do período, os animais foram eutanasiados e amostras de sangue e cerebelo foram coletadas. Foram mensuradas em amostras de soro a concentração de citocinas (IL-1b, TNF-a e IL-17). Em amostras de cerebelo, foi mensurada a atividade da Na,K-ATPase (NKA), da Glutationa-S-Transferase (GST), Glutationa Peroxidase (GPx) e Glutationa Redutase (GR). Além disso, foi mensurada a concentração de Glutationa Reduzida (GSH), de fosfolipídios totais (FLT), colesterol total (CT) e glicoesfingolipídios (GSLs) de membrana, em homogenatos cerebelares. Ainda, avaliou-se a expressão proteica das isoformas a1, a2 e a3-NKA, da extracellular signal-regulated kinase (ERK), da phosphorylated-extracellular signal-regulated kinase (p-ERK), do nuclear factor erythroid 2-related factor (Nrf2), do 4-hidroxynonenal (4-HNE) e da a-tubulin em homogenatos cerebelares. A análise estatística foi realizada utilizando Students t-test. Os dados foram expressos como média ± EPM. Todos os procedimentos foram previamente aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais (5288160218). Ao final do protocolo, observou-se que animais mantidos com dieta hiperlipídica apresentaram ganho significativo de peso e de massa gorda corporais, em relação aos controles, sem diferenças significativas quanto ao ganho de massa muscular. Quanto aos parâmetros séricos, observou-se aumento significativo nos níveis de TNF-a, sem afetar os níveis de IL-1b e IL-17, em animais obesos, comparados aos controles. Em homogenatos cerebelares, verificou-se que animais obesos apresentaram redução significativa na atividade a2,3-NKA e esta redução de atividade não estava relacionada à uma diminuição na expressão das isoformas a-2 e a-3 da NKA, em relação a animais controles. Ainda, observou-se aumento significativo na atividade das enzimas GST, GPx e GR e redução do conteúdo de GSH em animais obesos, em relação aos saudáveis. Verificamos que a ingestão de dieta hiperlipídica promoveu aumento do conteúdo de CT e redução dos FLT, sem afetar o conteúdo de GSLs, em relação aos controles. Identificou-se, ainda, que animais obesos apresentaram uma redução significativa da expressão citosólica de Nrf2 e um aumento da expressão nuclear deste fator, quando comparados aos saudáveis. Além disso, foi observado que animais obesos apresentaram aumento da expressão citosólica do 4-HNE e da p-ERK, sem afetar a expressão da ERK total, comparados aos controles. Os dados sugerem que a obesidade leva a uma inflamação sistêmica e ao estresse oxidativo. Tais resultados podem explicar a redução da atividade da Na,K-ATPase no cerebelo de camundongos fêmeas obesas.

Obesity is a chronic condition characterized by excessive white adipose tissue and lowgrade systemic inflammation. Na,K-ATPase is an electrogenic protein, essential for maintaining the electric potential of excitable cells, and its role in neuroinflammation has already been reported by several authors. The cerebellum, in turn, is more susceptible to oxidative damage, due to its lower content of antioxidant compounds. This study aimed to evaluate the influence of obesity on Na,K-ATPase activity in the cerebellum of female mice. Female Balb/c mice were given conventional or high-fat chow for 10 weeks. Throughout this period, mice were evaluated for weight gain, muscle mass and fat mass contents. At the end of the 10-week protocol, mice were euthanized and blood and cerebellum samples were collected. The concentration of cytokines (IL-1b, TNF-a and IL-17) were measured in serum samples. In cerebellum samples, Na,K-ATPase (NKA), Glutathione-S-Transferase (GST), Glutathione Peroxidase (GPx) and Glutathione Reductase (GR) activities were measured. In addition, the concentration of Reduced Glutathione (GSH), total phospholipids (PLT), total cholesterol (TC) and membrane glycosphingolipids (GSLs) in cerebellar homogenates were measured. Furthermore, the protein expression of a1, a2 and a3-NKA isoforms, extracellular signal-regulated kinase (ERK), phosphorylated-extracellular signal-regulated kinase (p-ERK), nuclear factor erythroid 2-related factor (Nrf2), 4-hydroxynonenal (4-HNE) and a-tubulin in cerebellar homogenates were evaluated. Statistical analysis was performed using Students t-test. Data were expressed as mean ± SEM. All procedures were previously approved by the Ethics in the Use of Animals Committee (5288160218). At the end of ten weeks, it was observed that mice given a high-fat diet had a significant gain in weight and body fat mass, compared to the control group. On the other hand, there were no significant differences regarding muscle mass gain between the evaluated groups. As for the serum parameters, a significant increase in TNF-a levels was observed, without affecting IL-1b and IL-17 levels, in obese mice, compared to the controls. In cerebellar tissue homogenates, it was verified that obese mice showed a significant reduction in a2,3-NKA activity, and this reduction was not related to a decrease in the protein expression of a-2 and a-3 NKA isoforms, compared to animals in control group. Furthermore, a significant increase in the activity of GST, GPx and GR and a reduction in the GSH content were observed in animals fed a high-fat diet, in comparison to the healthy group. Next, we found that obese mice have shown an increase in the TC content, accompanied by a reduction in PLT, without affecting the GSLs, compared to the control group. It was also observed that mice receiving the high-fat diet showed a significant reduction in the cytosolic protein expression of Nrf2 and an increase in its nuclear expression, when compared to mice fed control diet. Furthermore, it was observed that obese animals showed increased cytosolic expression of 4-HNE and p-ERK, without affecting total ERK expression, compared to healthy controls. Data suggest that obesity leads to systemic inflammation and oxidative stress. Such results may explain the reduction of Na,K-ATPase activity in the cerebellum of obese female mice.