A endo-oligopeptidase neurolisina (E.C.3.4.24.16; Nln) foi primeiro identificada em membranas sinápticas de cérebro de ratos, como uma peptidase com habilidade para hidrolisar a ligação Pro-Tyr inativando o neuropeptídeo neurotensina. Estudos subsequentes demonstraram que a Nln, recombinante e homogeneamente purificada, tem capacidade para hidrolisar diversos outros neuropeptídeos, incluindo peptídeos opioides, angiotensina e bradicinina. O desenvolvimento de camundongos C57BL6 com supressão da expressão gênica da Nln (Nln-/-), permitiram anteriormente avaliar a relevância biológica dessa enzima no metabolismo energético. O principal papel sugerido para a Nln no metabolismo energético, utilizando os animais Nln-/-, foi de aumentar a sensibilidade à insulina e induzir maior captação de glicose. O mecanismo molecular sugerido para essa característica metabólica dos animais Nln-/- envolve a participação de peptídeos intracelulares (InPeps), que nesses animais podem estar modulando a interação proteína-proteína (IPP) e a expressão de genes relacionados ao controle do metabolismo energético. Neste projeto, os animais Nln-/- e seus respectivos controles (animais C57BL6 selvagens; WT), machos e fêmeas (n = 5-8), foram alimentados com uma dieta padrão (DP) ou hipercalórica suplementada com leite condensado (DH) durante 8 semanas. Todos os animais e procedimentos utilizados foram aprovados pela CEUA ICB, de acordo com as normas estabelecidas pelo CONCEA (protocolo nº 4112010621). Foram avaliados a massa corporal, consumo de ração, calorias e água, a massa dos tecidos adiposos, hepático e muscular, a captação de glicose (TTG), a sensibilidade à insulina (TTI), a histologia do fígado, a expressão de diversos genes no tecido adiposo retroperitoneal, e o peptidoma no tecido adiposo gonadal. Os animais Nln-/- ou WT, machos e fêmeas (n = 5-8), alimentados com DP tiveram semelhantes: a) consumo de ração, calorias e água, b) ganho de massa corporal, c) tolerância à glicose, d) resistência à insulina, e) insulina plasmática, f) massa dos tecidos adiposos gonadal e retroperitoneal, g) massa do músculo estriado esquelético gastrocnêmico, e h) massa do fígado. Quando os animais Nln-/- e WT, machos e fêmeas (n = 5-8), foram alimentados com DH houve distinção na massa corporal, com maior ganho observado para os animais Nln-/- (machos e fêmeas). Os animais WT e Nln-/-, machos e fêmeas, alimentado(a)s com DH, tiveram um menor consumo de ração, comparados aos respectivos controles alimentados com DP. Alimentados com DH os animais Nln-/-, tanto machos como fêmeas, tiveram um consumo de ração maior que os animais WT. Estes dados sugerem que os animais Nln-/- alimentados com DH podem ter ganho maior de massa corpórea em decorrência do maior consumo calórico. Os animais Nln- /- (fêmeas) tiveram maior tolerância à glicose, bem como maior ganho de massa dos tecidos adiposos gonadal e retroperitoneal, bem como redução na massa do fígado (fêmeas e machos) comparados aos respectivos controles WT. Utilizando os animais alimentados com DP como referencial, houve alterações significativas na expressão de genes relacionados ao metabolismo energético do tecido adiposo retroperitoneal, tanto nos animais WT como Nln-/-, quando alimentados com DH. As alterações (tanto aumento como diminuição) nos níveis relativos de peptídeos intracelulares específicos que ocorreram entre animais Nln-/- comparados aos WT, se deram de maneira independente da dieta. Considerando que os animais Nln-/- (machos e fêmeas) apresentaram maior consumo calórico comparados aos animais WT, quando alimentados com DH, é possível sugerir a participação da Nln nos mecanismos relacionados à ingesta alimentar e à regulação do metabolismo de gordura nos tecidos adiposos investigados. A alteração na expressão de genes relacionados ao metabolismo energético e nos níveis relativos de InPeps específicos, sugerem um possível mecanismo molecular para o maior ganho de massa corporal e de tecidos adiposos. No entanto, estudos posteriores serão importantes para que se possa investigar o mecanismo molecular responsável pela maior ingesta e consequente maior ganho de massa corporal dos animais Nln-/-.

Endo-oligopeptidase neurolysin (E.C.3.4.24.16; Nln) was first identified in rat brain synaptic membranes, as a peptidase with the ability to hydrolyze the Pro-Tyr bond inactivating the neuropeptide neurotensin. Subsequent studies demonstrated that Nln, recombinant and homogeneously purified, has the capacity to hydrolyze several other neuropeptides, including opioid peptides, angiotensin, and bradykinin. The development of C57BL6 mice with suppression of Nln gene expression (Nln-/-) previously allowed the evaluation of the biological relevance of this enzyme in energy metabolism. The main role suggested for Nln in energy metabolism, using Nln-/- animals, was to increase insulin sensitivity and induce greater glucose uptake. The molecular mechanism suggested for this metabolic characteristic of Nln-/- animals involves the participation of intracellular peptides (InPeps), which in these animals may be modulating the protein-protein interaction (IPP) and the expression of genes related to the control of energy metabolism. In the present report, male and female Nln-/- animals and their respective controls (wild C57BL6 animals; WT) (n = 5-8) were fed a standard (DP) or hypercaloric diet supplemented with condensed milk (DH) for 8 weeks. All animals were used and maintained with a certificate approved by CEUA ICB and standards established by CONCEA (protocol No. 4112010621). Herein, were evaluated the body mass, feed quantities, calories and water intake, adipose tissue, liver and muscle mass, glucose uptake (GTT), insulin sensitivity (ITT), liver histology, expression of several genes in retroperitoneal adipose tissue, and the peptidome in the gonadal adipose tissue. Nln-/- or WT animals, male and female (n = 5-8), fed with DP had similar: a) food, calorie and water intake, b) body mass gain, c) glucose tolerance, d) insulin resistance, e) plasma insulin, f) gonadal and retroperitoneal adipose tissue mass, g) gastrocnemius skeletal muscle mass, and h) liver mass. When male and female Nln-/- and WT animals (n = 5-8) were fed DH, there was a difference in body mass, with greater gain observed for Nln-/- animals (males and females). WT and Nln-/- animals, male and female, fed DH, had a lower food intake compared to the respective controls fed DP. Fed with DH, Nln-/- animals, both males and females, had a higher food intake than WT animals. These data suggest that Nln- /- animals fed DH may have greater body mass gain due to higher caloric intake. Nln- /- animals (females) had greater glucose tolerance, as well as greater mass gain in gonadal and retroperitoneal adipose tissues, as well as a reduction in liver mass (females and males) compared to the respective WT controls. Compared to DP-fed animals, animals DH-fed presented significant changes in the expression of genes related to energy metabolism in retroperitoneal adipose tissue, both in WT and Nln-/- animals. The changes (both increases and decreases) in the relative levels of specific InPeps that occurred between Nln-/- animals compared to WT were independent of diet. Considering that Nln-/- animals (males and females) had higher caloric intake compared to WT animals, when fed with DH, it is possible to suggest the participation of Nln in mechanisms related to food intake and the regulation of fat metabolism in the adipose tissues investigated. The alteration in the expression of genes related to energy metabolism and in the relative levels of specific InPeps, suggest a possible molecular mechanism for the greater gain in body mass and adipose tissues. However, further studies will be necessary to better understand the molecular mechanism responsible for the higher intake and consequent higher body mass gain observed in Nln-/- animals.