Traumas oclusais oriundos de tratamentos odontológicos iatrogênicos, como restaurações mal adaptadas, potencialmente levam à inflamação orofacial e evolução para dor crônica. Anti-inflamatórios não-esteroides (AINEs), comumente empregados na clínica odontológica, reduzem a dor e inflamação, mas exibem riscos ao trato gastrointestinal. Estudo do nosso grupo mostrou eficácia analgésica e anti-inflamatória e citoproteção gástrica superior do doador híbrido de sulfeto de hidrogênio (H₂S) associado ao AINE, cetoprofeno (ATB-352) em comparação ao cetoprofeno. Os objetivos deste estudo incluem: i) desenvolver um modelo de dor inflamatória orofacial resultante de trauma oclusal em ratos ii) empregando doses equimolares do ATB-352, 4-HTBZ, e cetoprofeno, avaliar comparativamente a eficácia analgésica, anti inflamatória e citoproteção gástrica no modelo de trauma oclusal; iii) avaliar a participação do eixo caspase-1/IL-1b no mecanismo protetor do ATB-352 e, iv) determinar a segurança e citoproteção gástrica promovida pelo ATB-352 em linhagens de células epiteliais intestinais humanas. Para a padronização do trauma oclusal foram usados ratos Wistar submetidos à instalação de coroas em resina composta fotopolimerizável de 1mm de espessura sobre os molares inferiores direitos por 1, 3 e 7 dias. A instalação de coroas promoveu hipernocicepção orofacial e resposta inflamatória, de forma tempo-dependente, a partir do 1º dia, estendendo-se ao 7º dia, sendo este mais favorável para instalação do trauma oclusal. O tratamento com ATB 352 (4,6; 15 ou 46 mg/kg) e 4-HTBZ (1,5; 7,2; 15,6 mg/kg) reduziu a hipernocicepção mecânica orofacial, atividade de mieloperoxidase (MPO), concentração de citocinas IL-1b e IL-18 no músculo masseter e expressão de 3-nitrotirosina (3-NT). Já o tratamento com cetoprofeno (3, 10 ou 30 mg/kg) reduziu apenas os parâmetros inflamatórios e de estresse oxidativo. O tratamento simultâneo com ATB-352 (46 mg/kg) durante 7 dias reduziu a perda óssea e inibiu a expressão de caspase-1 no gânglio trigêmeo induzida pelo trauma oclusal, além de ser inofensivo à mucosa gástrica. Em cultura celular de linhagens glioma C6 (GC6), neuro-2a, BV-2 e AGS, o tratamento com ATB-352 (0001-5 mM) revelou alta taxa de viabilidade celular, via ensaio de MTT. Em linhagens celulares GC6 e neuro-2a, o tratamento concomitante com ATB-352 (0,01 mM) reverteu o aumento da expressão de caspase-1, induzido pelo estímulo com LPS (400 ng/ml) e ATP (2,5-5 mM) por 6 horas. Nas células neuro 2a, a inibição da caspase-1 pelo ATB-352 foi seguida pelo aumento aumentou da expressão de SOD-1 e redução de NLRP3. Em cultura de células epiteliais intestinais, o cetoprofeno, em concentração equimolar ao ATB-35 e 4-HTBZ, reduziu a viabilidade celular das células HIEC-6 estimuladas com IFN-g e TNF-a, e o tratamento com 4 HTBZ reverteu este efeito. Em cultura celular Caco-2/TC7, o aumento da permeabilidade paracelular e trans epitelial induzida pelo estímulo com IFN-g e TNF-a foi revertida pelo tratamento com 4-HTBZ, enquanto o cetoprofeno potencializou o dano à monocamada formada por estas células. Em conclusão, a instalação de coroas de resina mimetiza os sinais e sintomas do trauma oclusal em humanos, causando resposta hipernociceptiva prolongada e inflamação associada à ativação da caspase 1. Tais alterações foram prevenidas pelo tratamento com ATB-352, que também promoveu proteção ao trato gastrintestinal.

Occlusal trauma arising from iatrogenic dental treatments, such as poorly adapted restorations, potentially leads to orofacial inflammation and progression to chronic pain. Nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs), commonly used in dental clinics, reduce pain and inflammation but increase risks to the gastrointestinal tract. A study by our group showed analgesic and anti-inflammatory efficacy and superior gastric cytoprotection of the hydrogen sulfide (H₂S) hybrid donor associated with the NSAID, ketoprofen (ATB-352) compared to ketoprofen. The objectives of this study include: i) developing a model of orofacial inflammatory pain resulting from occlusal trauma in rats ii) employing equimolar doses of ATB-352, 4-HTBZ, and ketoprofen, comparatively evaluate the analgesic, anti-inflammatory, and gastric cytoprotection efficacy no occlusal trauma model; iii) evaluate the participation of the caspase-1/IL 1b axis in the protective mechanism of ATB-352 and, iv) determine the safety and gastric cytoprotection promoted by ATB-352 in human intestinal epithelial cell lines. To standardize occlusal trauma, Wistar rats were used and subjected to the installation of 1mm-thick-polymerizable composite resin crowns on the lower right molars for 1, 3, and 7 days. The installation of crowns promoted orofacial hypernociception and an inflammatory response, in a time-dependent manner, from the 1st day, extending to the 7th day, which is more beneficial for the installation of occlusal trauma. Treatment with ATB-352 (4.6; 15 or 46 mg/kg) and 4-HTBZ (1.5; 7.2; 15.6 mg/kg) impairs orofacial mechanical hypernociception, myeloperoxidase (MPO) activity, concentration of cytokines IL-1b and IL-18 in the masseter muscle and expression of 3-nitrotyrosine (3 NT). Treatment with ketoprofen (3, 10, or 30 mg/kg) only prevents inflammatory disruptions and oxidative stress. Simultaneous treatment with ATB-352 (46 mg/kg) for 7 days caused bone loss and inhibited caspase-1 expression in the trigeminal ganglion caused by occlusal trauma, besides being devoid of gastric mucosa damage. In cell culture of glioma lines C6 (GC6), neuro-2a, BV-2, and AGS, treatment with ATB-352 (0001-5 mM) revealed high rates of cellular predictions, via MTT assay. In GC6 and neuro-2a cell lines, concomitant treatment with ATB-352 (0.01 mM) reversed the increase in caspase-1 expression, induced by stimulation with LPS (400 ng/ml) and ATP (2.5- 5 mM) for 6 hours. In neuro-2a cells, caspase-1 inhibition by ATB-352 was followed by increased SOD-1 expression and reduced NLRP3. In cultured intestinal epithelial cells, ketoprofen, in equimolar concentration to ATB-35 and 4-HTBZ, reduced cellular viability in HIEC-6 cells stimulated with IFN-g and TNF-a, and treatment with 4-HTBZ reversed this effect. In Caco-2/TC7 cell culture, IFN-g and TNF-a stimulus increased paracellular and trans-epithelial permeability, which was reversed by treatment with 4-HTBZ, while ketoprofen potentiated the damage to the monolayer formed by these cells. In conclusion, the installation of resin crowns mimics the signs and symptoms of occlusal trauma in humans, causing a prolonged hypernociceptive response and inflammation associated with caspase-1 activation. These changes were prevented by treatment with ATB-352, which also provided protection to the gastrointestinal tract.