Considerada um dos maiores problemas de saúde pública, a malária no Brasil causa alta morbidade, atingindo quase exclusivamente a população da região amazônica, sendo o Plasmodium vivax a espécie mais prevalente no país. As frequentes infecções induzem a geração de uma imunidade clínica que protege o indivíduo das complicações da doença, mas não da infecção. Células B e T exercem importante papel na resposta imune protetora e, diante disso, neste trabalho, algumas subpopulações destes dois grupos celulares foram analisadas em amostras de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) obtidas de indivíduos com malária vivax na fase aguda e convalescente, de indivíduos controles expostos não infectados, moradores de uma área endêmica brasileira, e de indivíduos controles não expostos. Por citometria de fluxo multiparamétrica, a análise de PBMCs de 41 pacientes com malária, em comparação com 40 controles expostos não infectados, mostrou um aumento da frequência de células T reguladoras (Treg) que expressam CTLA-4 (uma molécula imunossupressora), com os níveis de expressão desta molécula sendo proporcionais à parasitemia. A frequência de células T foliculares reguladoras (Tfr) positivas para CTLA-4 também estava aumentada durante a malária. Estas células são um subgrupo das células Treg que atuam na regulação da resposta de células B e células T auxiliares foliculares (Tfh) nos centros germinativos. Células Tfh são especializadas em auxiliar as células B na produção de anticorpos com alta afinidade. Em nossas análises, foi observado que a infecção pelo P. vivax induziu um aumento da frequência destas células, com aquelas de perfil Th1 e Th2 estando em maiores proporções, quando comparadas aos controles expostos. Durante a malária aguda também encontramos maiores proporções de células B de memória atípica, que são mantidas mesmo após o tratamento da doença. O contrário foi observado para a população de células B reguladoras (Breg) com fenótipo CD24hiCD27+, que apresentaram uma queda em suas frequências na fase aguda da infecção. Após estímulo em cultura com lipopolissacarídeo (LPS), phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) e ionomicina, uma maior frequência de diversas subpopulações de células B produtoras de interleucina-10 (IL-10) foi encontrada nas amostras dos pacientes na fase aguda da malária em comparação com a fase convalescente (38 amostras pareadas analisadas). A resposta imune específica das células T CD4+ também foi investigada utilizando 25 pares de amostras de pacientes com malária aguda e na fase convalescente, 25 controles expostos e 13 controles não expostos. Para isso, foi realizado o mapeamento de peptídeos presentes em três proteínas expressas pelos merozoítos do P. vivax: o ectodomínio do antígeno 1 de membrana apical (AMA1ect), o domínio II da proteína de ligação ao antígeno Duffy (DBPII) e a porção de 42 kDa da proteína 1 de superfície do merozoíto (MSP1-42). Utilizando ensaios de ELISpot, foram identificados dois peptídeos imunodominantes que induziram a produção de IL-10 em 20 e 16% das amostras de fase aguda da malária, com um deles estando presente na DBPII e o outro na MSP1-42, respectivamente. Como estes peptídeos não foram amplamente reconhecidos na fase convalescente, concluímos que a resposta celular específica encontrada na fase aguda não é mantida após o tratamento da infecção.

Considered one of the biggest public health problems, malaria in Brazil causes high morbidity, affecting almost exclusively the population of Amazon region, with Plasmodium vivax being the most prevalent species in the country. Frequent infections induce generation of clinical immunity, which protects the individual from disease complications, but not from the infection. B and T cells play an important role in protective immune response, and therefore, in this work, some subpopulations of these two cell groups were analyzed in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) samples obtained from individuals with vivax malaria in the acute and convalescent phase, uninfected exposed control individuals, living in an endemic Brazilian area, and non-exposed control individuals. By multiparametric flow cytometry, analysis of PBMCs from 41 malaria patients, compared to 40 exposed uninfected controls, showed an increase in regulatory T cells (Treg) frequency that express CTLA-4 (an immunosuppressive molecule), with expression levels of this molecule being proportional to parasitemia. The CTLA-4 positive follicular regulatory T cells (Tfr) frequency was also increased during malaria. These cells are a Treg cells subgroup that regulates B cells and follicular helper T cells (Tfh) response in the germinal centers. Tfh cells are specialized to help B cells in the production of high affinity antibodies. In our analyzes, it was observed that P. vivax infection induced an increase in the frequency of these cells, with those of Th1 and Th2 profiles in greater proportions, when compared to exposed controls. During acute malaria, we also found higher proportions of atypical memory B cells, which are maintained even after disease treatment. The opposite was observed for the regulatory B cells (Breg) population with the CD24hiCD27+ phenotype, which showed a decrease in their frequencies in the acute phase of infection. After culture stimulation with lipopolysaccharide (LPS), phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and ionomycin, a higher frequency of several subpopulations of interleukin-10 (IL-10)-producing B cells was found in samples from patients with acute vivax malaria when compared to the convalescent phase (38 paired samples analyzed). The specific CD4+ T cells immune response was also investigated using 25 pairs of samples from patients with acute and convalescent malaria, 25 exposed controls, and 13 non-exposed controls. For this purpose, we carried out peptide mappings present in three proteins expressed by P. vivax merozoites: the apical membrane antigen 1 ectodomain (AMA1ect), Duffy binding protein domain II (DBPII) and the portion of 42 kDa of merozoite surface protein-1 (MSP1-42). Using ELISpot assays, two immunodominant peptides that induced IL-10 production in 20 and 16% of vivax malaria acute phase samples were identified, with one present in DBPII and the other in MSP1-42, respectively. As these peptides were not widely recognized in the convalescent phase, we conclude that the specific cellular response found in acute phase is not maintained after treatment.