A leishmaniose é um grupo de doenças negligenciadas causada por um parasito tripanossomatídeo pertencente ao gênero Leishmania podendo manifestar-se de diferentes formas de acordo com a espécie infectante e a resposta imune do hospedeiro. A leishmaniose está classificada em tegumentar (cutânea) e visceral, podendo a tegumentar manifestar-se nas formas localizada, difusa, disseminada e mucocutânea. As análises filogenéticas revelam uma relação parental entre diferentes espécies de Leishmania, no entanto para muitas espécies, o estado filogenético ainda não foi resolvido. O estudo tem o objetivo de utilizar as técnicas protêomicas para comparar o proteoma da forma promastigota de três espécies de Leishmania: Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis e Leishmania (Leishmania) infantum chagasi identificando diferenças proteicas entre as fases exponencial e estacionária entre as espécies e dentro de uma mesma espécie de modo a auxiliar a caracterização das diferentes espécies do gênero Leishmania. Além disso, para mimetizar o evento destes parasitos quando transferidos do flebotomíneo para o hospedeiro mamífero durante o repasto sanguíneo, uma parte dos parasitos foi incubada no 6° dia a 34° C por 24h. Como resultado identificamos um total de 6494, 3800 e 4155 para as condições exponencial, estacionária a 25°C e estacionária a 34°C respectivamente, tendo sempre maior quantidade de proteínas identificadas para L. (V.) braziliensis. Entre as condições analisadas a fase exponencial foi a que apresentou a maior quantidade de proteínas identificadas, e também de proteínas únicas. Das proteínas encontradas reguladas destacam-se proteínas ribossômicas, proteínas de choque térmico, quinases e proteínas envolvidas em vias metabólicas. As espécies L. (V.) braziliensis e L. (L.) infantum são as que apresentam maiores diferenças entre si, enquanto L. (L.) amazonensis apresenta um perfil intermediário. As três espécies apresentam uma distinção entre a condição de desenvolvimento (exponencial) e estacionária como esperado, mas a novidade é ver diferenciação no proteoma entre as duas condições estacionárias para L. (L.) amazonensis e L. (L.) infantum, não sendo observado o mesmo perfil para L. (V.) braziliensis. Os resultados comparativos entre a proteômica baseada em espectrometria de massas e western blotting apresentou diversidade de resultados mostrando que a metodologia utilizada nesse estudo vem a ser mais precisa na identificação de isoformas proteicas e pode oferecer uma complementariedade a essa técnica. Esse estudo mostra pela primeira vez a modulação de vias especificas na transição entre as fases de crescimento e a mudança de temperatura em L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis e L. (L.) infantum, melhorando o conhecimento sobre as vias chaves para a resposta do parasito ao ambiente.

Leishmaniasis is a group of neglected diseases caused by a trypanosomatid parasite belonging to the genus Leishmania and can manifest itself in different ways according to the infecting species and the immune response of the host. Leishmaniasis is classified as tegumentary (cutaneous) and visceral. Tegumentary can manifest itself in localized, diffuse, disseminated and mucocutaneous forms. Phylogenetic analyses have revealed a parental relationships between different species of Leishmania, however for many species, the phylogenetic state has not yet been solved. The objective of this study was to compare the promastigote proteome of three species of Leishmania: Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis and Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, identifying protein differences between the exponential and stationary phases between the species and within a same species, in order to help the characterization of the different species of the genus Leishmania. In addition, to mimic the event of these parasites when transferred from the phlebotomine sandflies to the mammalian host during the blood repast, a part of the parasites were incubated on day 6 at 34° C for 24 h. As a result we identified a total of 6494, 3800 and 4155 for the exponential, stationary conditions at 25°C and stationary at 34°C respectively. A higher number of proteins was identified for L. (V.) braziliensis. Among the conditions analyzed, the exponential phase was the one with the highest amount of identified proteins classes. Ribosomal proteins, heat shock proteins, kinases and proteins involved in metabolic pathways were highlighted. The L. (V.) braziliensis and L. (L.) infantum species are the ones that present the most differences among them, while L. (L.) amazonensis presents an intermediate profile. The three species present a distinction between growth condition (exponential) and stationary as expected, but the novelty is to see differentiation in the proteome between the two stationary conditions for L. (L.) amazonensis and L. (L.) infantum not being observed the same for L. (V.) braziliensis. The comparative results between the proteomics based on mass spectrometry and western blot showed a diversity of results demonstrating that the methodology used in this study is more accurate in the identification of proteoforms and could be used as a complement for that technique. This study shows for the first time the modulation of specific pathways in the transition between growth phases and temperature shift in L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis and L. (L.) infantum, improving the knowledge about the key pathways for parasite response to the environment.