Acredita-se que a presença de anticorpos com reação cruzada em uma segunda infecção pelo vírus da dengue seja responsável pelo agravamento da doença. No entanto, ainda há várias controvérsias na literatura no que se refere ao papel dos anticorpos na neutralização da infecção viral e/ou no agravamento da doença. Para melhor estudar as propriedades neutralizantes e/ou patológicas dos anticorpos gerados naturalmente durante a infecção pelo vírus da dengue, o presente projeto tem por objetivo avaliar a resposta policlonal e produzir anticorpos monoclonais a partir de células B isolados de pacientes infectados pelo vírus da dengue. Para isso, os genes que codificam para as porções variáveis das cadeias leve e pesada de suas imunoglobulinas foram clonados em vetores de expressão em células eucarióticas. Desta forma, diversos anticorpos monoclonais específicos para a proteína de interesse foram gerados. Neste trabalho, fomos capazes de obter 154 amostras de soros de pacientes diagnosticados com dengue, dos quais 23 pacientes apresentaram altos títulos de anticorpos contra proteína do envelope, NS1 ou EDIII. Desses, oito pacientes apresentaram anticorpos de reatividade cruzada para os quatros sorotipos de dengue capazes de neutralizar mais que 90% da infecção, nove pacientes apresentaram capacidade acima de 80% de neutralizar um ou mais sorotipos e quatro pacientes apresentaram capacidade de neutralização abaixo de 30% para os quatros sorotipos de dengue. Além disso, constatamos que dentre os vírus testados, as amostras de soro dos pacientes apresentaram maior exacerbação da infecção para DENV1 (68%), DENV2 (75%) e DENV4 (75%). Em relação a resposta monoclonal, obtivemos os PBMCs de quatro pacientes e realizamos o single cell sorting a fim de isolar as células B de memória reativas contra proteína E recombinante. Dos 13 clones expressos, apenas quatro AcMos (anticorpo monoclonal) foram capazes de reconhecer a proteína E recombinante. Dentre os quatro AcMos, o clone MT479-F11 apresentou maior capacidade de neutralização para os quatros sorotipos de DENV (DENV1 ao DENV4), bem como para ZIKV, em comparação aos demais AcMos.

It is believed that the presence of cross-reacting antibodies in a second dengue virus infection is responsible for the worsening of the disease. However, there are still several controversies in the literature regarding the role of antibodies in neutralizing viral infection and / or worsening of the disease. To better study the neutralizing and / or pathological properties of naturally generated antibodies during dengue virus infection, the present project aims to evaluate the polyclonal response and to produce monoclonal antibodies from B cells isolated from patients infected with the dengue virus. For this, the genes that code for variable portions of the light and heavy chains of their immunoglobulins were cloned into expression vectors in eukaryotic cells. In this way, several monoclones applicable to a protein of interest were generated. In this work, we were able to obtain 154 serum samples from patients diagnosed with dengue, of which 23 patients had high levels of antibodies against the envelope protein, NS1 or EDIII. Of these, eight patients presented cross-reactivity antibodies to the four dengue serotypes capable of neutralizing more than 90% of the infection, nine patients had a capacity above 80% to neutralize one or more serotypes and four patients had a neutralization capacity below 30% for the four dengue serotypes. In addition, we found that among the viruses tested, serum samples from the patients showed a greater exacerbation of the infection for DENV1 (68%), DENV2 (75%) and DENV4 (75%). Regarding the monoclonal response, we obtained the PBMCs from four patients and performed the single cell sorting in order to isolate the reactive memory B cells against recombinant E protein. Of the 13 clones expressed, only four mAbs (monoclonal antibody) were able to recognize recombinant E protein. Among the four MAbs, the clone MT479-F11 showed a greater neutralization capacity for the four serotypes of DENV (DENV1 to DENV4), as well as for ZIKV, in comparison to the other MAbs.