Em plantas e fungos é conhecida a relação entre defeitos na homeostase dos esteróis e a fragilidade da parede celular. Por exemplo, em fungos, mutações nas últimas etapas da via de biossíntese do ergosterol ou tratamento com inibidores da biossíntese de esteróis (fungicidas SBI) resultam naquela fragilidade. O mecanismo para este fenômeno ainda é desconhecido, embora seja de interesse para entender os efeitos estáticos dos fungos destes importantes compostos médicos e agrícolas, bem também como o envolvimento dos lipídios na regulação dos processos biológicos. Anteriormente, nosso grupo reportou que os 8-desidroesteróis inibem a atividade da V-ATPase em vivo, com consequências negativas para a endocitose e localização anormal de Pma1p, uma proteína da membrana plasmática, no vacúolo. Isto levou-nos a pensar que a acumulação de esteróis anormais poderia estar afetando a biossíntese da parede celular através de uma interação inibitória lipídeo-proteína ou através da deslocalização das proteínas da membrana plasmática. As primeiras proteínas candidatas a considerar susceptíveis de encontrarem-se afetadas seriam, as responsáveis pela síntese de polímeros da parede celular, particularmente Fks1p (principal subunidade da Glucano Sintase (GS)), sendo que o glucano é o principal polímero da parede celular. As primeiras análises mostraram que os mutantes para o gene ERG2 apresentavam níveis reduzidos de glucano nas suas paredes celulares, concomitantemente com uma menor atividade de glucano sintase em extratos celulares. Particularmente, no mutante condicional erg2Gal derivado de selvagem crescido em meio de glucose (semelhante a uma célula fúngica tratada com fungicida), apresentou uma redução significativa na Vmax da glucano sintase que pode ser explicada por queda nos níveis de polipeptídeo medidos por Western blot. Entretanto, nenhuma alteração na atividade da via de sinalização CWI foi observada. Os dados sobre a localização de Fks1p no selvagem e nos mutantes para o gene ERG2 mostraram que está proteína encontra-se distribuída amplamente em membranas intracelulares junto com a membrana plasmática, porém diferindo em quantidade de Fks1p dependendo do mutante. No geral, nossos dados mostraram que provavelmente há uma retenção da principal subunidade Fks1p da GS em membranas associadas ao retículo endoplásmico e aparelho de Golgi, além disso também há uma redução de aproximadamente um terço na quantidade de Fks1p isso explicaria porque se observa uma fragilidade na parede celular nos mutantes para o gene ERG2. .

In both plants and fungi it is known the relation between defects in sterol homeostasis and fragility of the cell wall. For example, in fungi, mutations in the late steps of the ergosterol biosynthesis pathway or treatment with Sterol Biosynthesis Inhibitors (SBI fungicides) results in such fragility. The mechanism for this phenomenon is still unknown, although it is of capital importance to understand the fungistatic effects of these medical and agricultural important compounds, as well as the involvement of lipids in the regulation of biological processes. Previously, our group reported that 8-dehydrosterols inhibit V-ATPase activity in vivo, with negative consequences for endocytosis and normal localization of Pma1p, a plasma membrane protein, which was relocated partially to the vacuole. This prompted us to think that accumulation of abnormal sterols may be affecting cell wall biosynthesis through either an inhibitory lipid-protein interaction or through mislocalization of membrane proteins. The first candidate proteins to consider likely to be affected would be those responsible for the synthesis of cell wall polymers, particularly Fks1p (the main glucan synthase) since glucan is the major polymer in the cell wall. Mutants in the ERG2 gene showed reduced levels of glucan in their cell walls concomitant with a smaller glucan synthase activity in whole cell extracts. Particularly, in a W303-1a-derived GAL1promERG2 conditional mutant grown on glucose media (akin to a fungicide-treated fungal cell), a reduction in the glucan synthase Vmax was clear. Similarly, Fks1p protein levels showed a decrease in erg2- mutants, with a drop similar in extent to that observed in the Vmax. However, no alteration in the activity of the CWI signalling pathway was observed. Data on the location of Fks1p in wild-type cells and mutants for the ERG2 gene showed this protein present in a wide array of intracellular membranes, as well as at the plasma membrane, although they differed in their levels. On the whole, our data showed that endoplasmic reticulum/Golgi apparatus retention of the main glucan synthase subunit Fks1p, together with a lower polypeptide level, are probably some of the main mechanisms for cell wall weakness in ERG2 mutants .