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Thèse de Doctorat
DOI
https://doi.org/10.11606/T.42.2022.tde-18082023-100625
Document
Auteur
Nom complet
Analí Del Milagro Bernabé Garnique
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2022
Directeur
Jury
Santelli, Glaucia Maria Machado (Président)
Amaral, Jonatas Bussador do
Colquhoun, Alison
Engler, Silvya Stuchi Maria
 
Titre en portugais
Caracterização de culturas celulares homotípicas e heterotípicas em 3D de NSCLC e seu uso para screening de quimioterápicos.
Mots-clés en portugais
Cultivo celular em 3D (Esferoides)
Fibroblasto associado a câncer
Macrófago associado ao tumor
Microambiente tumoral
NSCLC
Resumé en portugais
Nos últimos anos o estudo do cultivo celular em 3D tem aumentado como um modelo que mimetiza o microambiente tumoral (TME). O TME carateriza-se por apresentar grande heterogeneidade celular, permitindo a modulação de diferentes vias de sinalização que permitem enriquecer esse microambiente. Vários tumores apresentam duas populações que se encontram em proporções elevadas, os fibroblastos associadados a câncer (CAFs) e os macrófagos associados ao tumor (TAM). Estas células estão entre as maiores responsáveis pela interação e modulação de diferentes vias de sinalização como citocinas e o remodelamento de matriz que resulta em vantagens na proliferação, invasão e metástase. Essa interação é a responsável pelo enriquecimento e manutenção de uma população que tem sido relacionadada à recidiva e metástase no câncer, elas apresentam características de autorenovação e início de tumor, e são chamadas de células tronco de câncer e apresentam expressão diferencial de fatores de transcrição assim como de marcadores de membrana celular. Assim, o objetivo deste trabalho é o estudo de culturas celulares em 3D de NSCLC sozinhas e em combinação com fibroblastos dérmicos de curta duração e com macrófagos diferenciados da linhagem THP-1. Foram caracterizados esferoides homotípicos A549, LC-HK2 e FDH e heterotípicos A549/FDH, LC-HK2/FDH, A549/Mcf e LC-HK2/Mcf, foram mantidos na cultura por 7 dias, a caracterização morfológica foi por meio de medida do diâmetro, acompanhamento da densidade celular, imunofluorescência do citoesqueleto das células que formam os esferoides, microscopia eletrônica de transmissão. Foi avaliada a viabilidade celular e proliferação por meio de coloração com Hoechst e IP, perfil do ciclo celular por citometria de fluxo, e ensaio de migração celular numa superfície aderente. Foi analisado também a expressão proteíca de CSC e proteínas de adesão celular. Os esferoides homotípicos e heterotípicos foram tratados com Doxorubicina, Estaurosporina, Cisplatina e Cromomicina A5. E foram avaliados seus efeitos na viabilidade celular, ciclo celular, senescência, e consumo de ATP. Os esferoides formados apresentaram diferentes características que permitem o estudo tanto na interação das diferentes células que compõem o microambiente tumoral quanto para o uso no teste de quimioterápicos.
 
Titre en anglais
Characterization of 3D homotypic and heterotypic cell cultures of NSCLC and their use for chemotherapy screening.
Mots-clés en anglais
Cancer-associated Fibroblasts
Cell culture in 3D (Spheroids)
NSCLC
Tumor microenvironment
Tumor-associated macrophage
Resumé en anglais
In recent years the study of 3D cell culture has increased as a model that mimics the tumor microenvironment (TME). The TME is characterized by showing cellular heterogeneity, allowing the modulation of different signaling pathways that enrich this microenvironment. Tumors exhibit two populations found in high proportions: Cancer-associated fibroblasts (CAFs) and Tumor-associated macrophages (TAM). These cells are responsible for the interaction and modulation of different signaling pathways such as cytokines and matrix remodeling that result in advantages in proliferation, invasion, and metastasis. This interaction is responsible for the enrichment and maintenance of a population that has been related to resistance and metastasis in cancer, they have characteristics of self-renewal and tumor initiation, they are called cancer stem cells (CSC), and have different expression of transcriptional factors and cell membrane markers. Thus, the aim of this work is the study of 3D cell cultures of NSCLC alone and in combination with short-lived dermal fibroblasts and with differentiated macrophages of the THP-1 lineage. Homotypic spheroids A549, LC-HK2, and FDH and heterotypic spheroids A549/FDH, LC-HK2/FDH, A549/Mcf, and LC-HK2/Mcf were characterized, they were kept in culture for 7 days, and the morphological characterization was by measuring the diameter, monitoring of cell density, immunofluorescence of the cytoskeleton of cells that form the spheroids, transmission electron microscopy. Hoechst and PI staining evaluated cell viability and proliferation, cell cycle profiling by flow cytometry, and cell migration assay on an adherent surface. The protein expression of CSC and cell adhesion proteins was also analyzed. Homotypic and heterotypic spheroids were treated with Doxorubicin, Staurosporine, Cisplatin, and ChromomycinA5. And their effects on cell viability, cell cycle, senescence, and ATP consumption were evaluated. These spheroids showed different characteristics that allow the study of the interaction of the different cells that compose the tumor microenvironment and for use in chemotherapy screening.
 
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Date de Libération
2025-08-17
Date de Publication
2023-08-23
 
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