Introdução e Objetivos: Compreender a interação entre cânceres extremamente agressivos, como o glioblastoma (GBM), e o metabolismo dos ácidos graxos poderia contribuir para a melhora de terapias anti-tumorais. A 15-lipoxigenase-1 (15-LOX-1), uma enzima que metaboliza o ácido linoleico (LA) e o ácido araquidônico (AA), induz efeitos pró ou anti-tumorigênicos em diferentes tipos de câncer. Seu papel no GBM ainda não foi claramente descrito. O objetivo deste estudo foi descrever a influência da 15-LOX e seus metabólitos no crescimento, migração e potencial invasivo de células de GBM. Delineamento Experimental: Duas linhagens celulares de GBM foram cultivadas e tratadas in vitro com metabólitos da 15-LOX (Ácido 13(S)-Hidroxioctadecadienoico (13-HODE), 9-HODE e Ácido 15(S)-Hidroxieicosatetraenoico (15-HETE)) e/ou inibidores de 15-LOX (LUT e NDGA). Curvas de viabilidade com MTT (HODEs [0,1-1M]) e curvas de dose-resposta (HODEs [1-10 µ M]; LUT [7,5-15 µM]; NDGA [20-40 µM]) foram realizadas por 24h, 48h, 72h. Em seguida, foram realizados RT-PCR convencional e/ou quantitativo das células (RNAms de 15-LOX e seus correspondentes downstream: PPARs, GPR132, MMPs). Os ensaios de fechamento de ferida foram realizados após 12 horas de tratamento (HODEs [5 µM]; LUT [15 µM]; NDGA [40µM]) para avaliar a migração. Em seguida, foram realizadas zimografias em gelatina (10mg/mL) e western blot (40g de proteína/amostra) para identificar a influência desses metabólitos e inibidores no potencial invasivo do GBM (definida aqui como a presença/atividade das MMPs). Resultados e Discussão: A via de 15-LOX está presente e ativa nas linhas celulares de GBM. 13-HODE [5 µM] e 9-HODE [5-10 µM] aumentaram a contagem de células em U87MG (n = 3). Inibidores de 13-HODE e 15-LOX-1, LUT [15 µM] e NDGA [40µM], diminuíram a migração na linhagem celular T98G, e NDGA reduziu a atividade de MMP2 e aumentou a forma latente de MMP2. Os tratamentos com 13-HODE / 9-HODE aumentam o RNAm de MMP2 em T98G e U87-MG, respectivamente. Todos os dados foram plotados e analisados usando o GraphPad Prism 5.0. A análise entre dois grupos foi realizada com o teste T de Student, e a ANOVA de duas vias com pós-teste de Bonferroni foi usado para comparar mais de dois grupos de dados. As diferenças foram consideradas estatisticamente significativas quando p< 0,05. Conclusões e Perspectivas: 13-HODE e 9-HODE influenciam o crescimento de células de GBM, 13-HODE e 15-LOX inibiram a migração, e 13-HODE/9-HODE aumentaram o potencial invasivo, enquanto a inibição de 15-LOX diminuiu o potencial invasivo. 15-LOX e seus metabólitos derivados de LA exercem uma influência pró-tumorigênica sobre as células de GBM in vitro. Novos estudos esclarecerão se essas relações se correlacionam positivamente com a malignidade.

Introduction and Objectives: Understanding the interaction between extremely aggressive cancers, like glioblastoma (GBM), and fatty acid metabolism could contribute to improve anti-tumoral therapies. 15-Lipoxygenase-1 (15-LOX-1), a linoleic acid (LA) and arachidonic acid (AA) metabolizing enzyme, induces both pro- and anti-tumorigenic effects in different cancer types. Its role in glioblastoma has not yet been clearly described. The aim of this study was to describe the influence of 15-LOX and its metabolites on GBM cell growth, migration and invasive potential. Experimental Design: Two GBM cell lines were cultivated and treated in vitro with 15-LOX metabolites (13(S)-Hydroxyoctadecadienoic Acid (13-HODE), 9-HODE and 15(S)-Hydroxyeicosatetraenoic Acid (15-HETE)) and/or 15-LOX inhibitors (LUT and NDGA). MTT viability curves (HODEs [0.1-1 µM]) and dose response curves (HODEs [1-10 µM]; LUT [7.5-15 µM]; NDGA [20-40 µM]) were performed over 24h, 48h, 72h. Next, conventional and/or quantitative RT-PCRs (15-LOX and related downstream mRNAs: PPARs, GPR132, MMPs) of the cells were performed. Wound healing assays were performed after 12h of treatment (HODEs [5 µ M]; LUT [15 µM]; NDGA [40 µM]) to examine migration. Then, gelatin zymography (10mg/mL) and western blots (40 µg of protein/sample) were performed to identify the influence of these metabolites and inhibitors on GBM invasive capacity (defined here as the presence/activity of MMPs). Results and Discussion: The 15-LOX pathway is present and active in the GBM cell lines. Both 13-HODE [5M] and 9-HODE [5-10M] increased cell count in U87MG (n=3). 13-HODE and 15-LOX-1 inhibitors, LUT [15 µM] and NDGA [40 µM], decreased migration in cell line T98G, and NDGA reduced matrix metalloprotease (MMP2) activity and increased the latent form of MMP2. 13-HODE/9-HODE treatments increase MMP2 mRNA in T98-G and U87-MG, respectively. All data were plotted and analyzed using GraphPad Prism 5.0. Analysis between two groups was performed with Student's T test, and a two-way ANOVA with Bonferroni post-test was used to compare multiple groups. The differences were considered statistically significant at p<0.05. Conclusions and Perspectives: 13-HODE and 9-HODE influence GBM cell growth, 13-HODE and 15-LOX inhibition decreased migration, and 13-HODE/9-HODE increased invasive potential, while 15-LOX inhibition decreased invasive potential. 15-LOX and its LA-derived metabolites exercise a certain pro-tumorigenic influence on GBM cells in vitro. Further studies will clarify if these relationships positively correlate with malignancy.