Células proliferativas são encontradas por toda glândula durante o desenvolvimento pós-natal do rato e, após o desmame, estão concentradas na região do istmo e do colo. Nos animais adultos, um nicho adicional é encontrado também na base da glândula, mas a caracterização de marcadores para células-tronco/proliferativas ainda é discutida na literatura e pouco se sabe sobre a atividade dessas células durante o desenvolvimento pós-natal. Desconhece-se a organização do ambiente, em termos de fatores de crescimento e sinalização, e como o padrão de alimentação pode afetar esses elementos e influenciar a maturação da glândula. O período de amamentação é crítico para a maturação do estômago em termos de fornecimento de nutrientes e fatores de crescimento, e a interrupção abrupta do aleitamento materno pode ser prejudicial ao desenvolvimento do órgão. Assim, nossa hipótese de estudo foi de que a mudança abrupta de dieta com desmame precoce acarretaria perturbações nos nichos proliferativos que poderiam se estender até a vida adulta. Nosso objetivo foi avaliar: como o desmame precoce regula a atividade proliferativa em termos de distribuição e dinâmica de cinética celular; a expressão de genes importantes na regulação dos nichos proliferativos, e a presença de Troy (marcador de célula-tronco) nas populações que compõe o epitélio gástrico de ratos. No 15º dia, filhotes de ratos Wistar foram divididos em dois grupos: amamentado (A) e desmame precoce (DP). Os animais A permaneceram com suas mães e foram amamentados até o 21º dia (desmame no biotério). Já os animais DP foram separados de suas mães e mantidos em outra gaiola, onde a dieta passou a ser uma pasta de ração hidratada. Amostras da mucosa gástrica foram coletadas aos 15, 18, 30, 60 e 120 dias para análises de morfologia, expressão gênica por RT-qPCR e níveis proteicos por imuno-histoquímica e Western Blot. Os resultados indicaram uma distribuição distinta de células proliferativas Ki-67+ entre os A e DP de 18 dias, os quais apresentaram um perfil semelhante ao dos adultos. Além disso, o DP acarretou um aumento da proliferação na base da glândula nos animais de 60 dias, mas não observamos diferenças aos 120 dias. A dinâmica de crescimento da glândula varia com o avanço da idade após o DP, e a cinética celular foi estudada por incorporação de BrdU e EdU. A distribuição de células BrdU+, EdU+ e BrdU/EdU+ variou entre A e DP e ao longo das idades, indicando efeitos específicos do DP sobre a entrada no ciclo celular. Em relação a expressão gênica, o DP diminuiu Wnt3, Notch1, Notch2, e aumentou Bmp2 aos 18 dias. Já aos 60 dias, o DP aumentou Axin2, Notch1 e Notch2, sem diferenças aos 120 dias. Por meio de análise in silico observamos que componentes das vias Notch, BMP, Wnt e SHH são diferentemente expressos nas células zimogênicas e parietais. Quanto às células Notch1+ o DP diminuiu a marcação aos 60 dias, enquanto células Notch2+ aumentaram no istmo e diminuíram na base aos 60 dias. Quanto à distribuição de Troy durante o desenvolvimento pós-natal, constatamos que do 3º ao 15º dia, o número de células Troy+ não varia, mas a partir do 18º dia essa população aumenta. Em níveis proteicos, o DP aumentou Troy aos 18 dias, mas aos 60 dias ocorre uma inversão com a diminuição desses níveis. Concluímos que o desmame precoce promove em efeitos imediatos e tardios na distribuição de células proliferativas na glândula gástrica, afeta a entrada de células em ciclo celular e a expressão de marcadores de célula-tronco, modulando genes importantes nas vias de regulação dos nichos proliferativos.

Proliferative cells are found throughout the gland during postnatal development of the rat and, after weaning, are concentrated in the isthmus and neck region. In adult animals, an additional niche is also found at the base of the gland, but the characterization of markers for stem/proliferative cells is still discussed in the literature and little is known about the activity of these cells during postnatal development, and the organization of the environment, in terms of growth factors and signaling, and how the feeding pattern can affect these elements and influence the maturation of the gland is unknown. The breastfeeding period is critical for the maturation of the stomach in terms of nutrient supply and growth factors, so abrupt cessation of breastfeeding may be detrimental to the development of the organ. Thus, our hypothesis was that abrupt dietary change with early weaning entails perturbations in the proliferative niche that may extend into adulthood. Our aim was to evaluate how early weaning regulates proliferative activity in terms of distribution and dynamics of cell kinetics, the expression of genes important in the regulation of proliferative niches, and to evaluate the presence of Troy (reserve stem cell marker) in the the gastric epithelium of rats. On day 15, Wistar rat pups were divided into two groups: suckling (S) and early weaning (EW). The S animals remained with their mothers and were breastfed until day 21. The EW rats were separated from their mothers and kept in another cage, where the diet became a paste of hydrated feed. Gastric mucosa samples were collected at 15, 18, 30, 60 and 120 days for analysis of morphology, gene expression by RT-qPCR and protein levels by immunohistochemistry and Western Blot. The results indicated a distinct distribution of Ki-67+ proliferative cells between 18-day S and EW, which showed a similar profile to adults. In addition, EW led to increased proliferation at the base of the gland in the 60-day-old animals, but no differences were observed at 120 days. Gland growth dynamics vary with advancing age after EW, and cell kinetics were studied by BrdU and EdU incorporation. The distribution of BrdU+, EdU+ and BrdU/EdU+ cells varied between S and EW and across ages, indicating specific effects of EW on cell cycle entry. Regarding gene expression, EW decreased Wnt3, Notch1, Notch2, and increased Bmp2 at 18 days. At 60 days, EW increased Axin2, Notch1 and Notch2, with no differences at 120 days. In silico analysis indicated the presence of Notch, BMP, Wnt and SHH pathway components differentially expressed in zymogenic and parietal cells. As for Notch1+ cells, EW decreases the number of labelled cells at 60 days and Notch2+ cells increase the number of cells in the isthmus and decreases at the base at 60 days. Regarding the Troy marker, we found that from day 3 to 15 the number of Troy+ cells does not differ, and from day 18 the number of Troy+ cells increase in the gastric mucosa. In protein levels, EW increases Troy at 18 days, but at 60 days there is a reversal with a decrease in these levels. We conclude that EW causes immediate and delayed effects on proliferation and stem cell markers in the gastric mucosa, modulating important genes in proliferative niche regulation pathways.