Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.42.2022.tde-02122022-161132
Documento
Autor
Nome completo
Franciele Rodrigues Araujo
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2022
Orientador
Banca examinadora
Bevilacqua, Estela Maris Andrade Forell (Presidente)
Cabar, Fábio Roberto
Lorenzon, Aline Rodrigues
Santos, Débora Cristina Damasceno Meirelles dos
Título em português
Efeito citotóxico e indutor de inflamação da Azatioprina sobre os vilos placentários.
Palavras-chave em português
Gestação
Imunossupressão
Inflamação
Inflamassoma
Vilo coriônico
Resumo em português
A utilização de fármacos imunossupressores é fundamental para a sobrevida de pacientes com inúmeras desordens, como doenças autoimunes e a doença inflamatória intestinal, e para evitar a rejeição de órgãos após transplantes. O número de mulheres que engravidam sob tratamento com esses fármacos tem aumentado muito nos últimos anos, embora as informações referentes ao potencial de toxicidade destes fármacos sobre o feto e a placenta ainda sejam limitadas. Neste contexto, o objetivo central foi investigar o impacto do fármaco imunossupressor Azatioprina sobre os vilos coriônicos de placentas humanas, no que tange à vitalidade destas células e à produção de citocinas pró-inflamatórias. Dado o potencial citotóxico deste fármaco, nossa hipótese é que seu uso pode comprometer a homeostase das células placentárias, que sinaliza ao sistema imune materno com a liberação de IL-1β e IL-18. Materiais e Métodos. Foram utilizados vilos coriônicos dissecados de placentas de gestantes consideradas saudáveis por exames clínicos e bioquímicos, coletadas no Serviço de Obstetrícia da Faculdade de Medicina e no Hospital Universitário, da Universidade de São Paulo. Os vilos coriônicos foram cultivados em meio DMEM suplementado com soro bovino fetal, a 37oC, em condições de umidade e com 5% CO2. As culturas foram tratadas com o fármaco imunossupressor Azatioprina em concentrações que variaram de 0 a 100 ng/mL, por 24 horas. As análises das amostras incluíram a avaliação de atividade metabólica mitocondrial pelo ensaio de MTT, taxas de morte celular pela atividade da enzima LDH, morfologia dos vilos após cultivo e exposição ao fármaco e também a expressão de IL-1β, IL-18 e de Caspase-1 clivada por Western Blotting. Resultados. A presença de azatioprina no meio de cultura reduziu a atividade metabólica mitocondrial dos explantes placentários (p<0.05), assim como aumentou as taxas de injuria celular (p<0.05) em comparação com as amostras do grupo controle. A presença de azatioprina também induziu a expressão de IL-1β e IL-18 concomitante à ativação de caspase-1 (p<0.05). Conclusão. Os dados obtidos sugerem que a presença da azatioprina no meio de cultura causou um microambiente citotóxico que interferiu com o metabolismo dos vilos coriônicos induzindo injuria e ativando a produção de citocinas pró-inflamatórias. Estes dados mostram que a Azatioprina pode alterar a homeostase das células placentárias e sugerem que a produção de IL-1β e IL-18 pode estar atuando como sinalizadores deste desequilíbrio.
Título em inglês
Azathioprine cytotoxic and inflammation-inducing effect on placental villi.
Palavras-chave em inglês
Chorionic villous
Gestation
Immunosuppression
Inflammasome
Inflammation
Resumo em inglês
Introduction. Immunosuppressive drugs are essential for the survival of patients with numerous disorders, such as autoimmune and inflammatory bowel diseases, and to avoid organ rejection after transplantation. The number of women who become pregnant under treatment with these drugs has increased dramatically in recent years. However, information regarding the potential toxicity of these drugs on the fetus and placenta is still limited. In this context, our main objective was to investigate the impact of the immunosuppressive drug Azathioprine on the chorionic villi of human placentas regarding the vitality of these cells and the production of pro-inflammatory cytokines. Given the cytotoxic potential of this drug, we hypothesize that its use may compromise the homeostasis of placental cells, which signals the maternal immune system with the release of IL-1β and IL-18. Materials and methods. Chorionic villi were dissected from placentas of pregnant women considered healthy by clinical and biochemical tests and collected at the Obstetrics Service of the Faculty of Medicine and the University Hospital of the University of São Paulo. Chorionic villi were cultured in DMEM medium supplemented with fetal bovine serum, at 37oC, under humid conditions, and with 5% CO2. Cultures were treated with the immunosuppressive drug Azathioprine at concentrations ranging from 0 to 100 ng/mL for 24 hours. The analysis of the samples included the evaluation of mitochondrial metabolic activity by the MTT assay, cellular injury by the activity of the LDH enzyme, morphology of the villi after exposure to the drug, and the expression of IL-1β, IL-18, and Caspase -1 cleaved by western blotting. Results. The presence of azathioprine in the culture medium reduced the mitochondrial metabolic activity of placental explants (p<0.05), as well as increased cellular injury rates (p<0.05) compared to samples from the control group. The presence of azathioprine also induced the expression of IL-1β and IL-18 concomitant with caspase-1 activation (p<0.05). Conclusion. The data obtained suggest that Azathioprine caused a cytotoxic microenvironment that interfered with chorionic villus metabolism, inducing injury and activating the production of pro-inflammatory cytokines. These data show that Azathioprine can alter the homeostasis of placental cells and suggest that the production of IL-1β and IL-18 may be acting as indicators of this imbalance.
AVISO - A consulta a este documento fica condicionada na aceitação das seguintes condições de uso:
Este trabalho é somente para uso privado de atividades de pesquisa e ensino. Não é autorizada sua reprodução para quaisquer fins lucrativos. Esta reserva de direitos abrange a todos os dados do documento bem como seu conteúdo. Na utilização ou citação de partes do documento é obrigatório mencionar nome da pessoa autora do trabalho.
Data de Liberação
2024-12-01
Data de Publicação
2022-12-08