O HIV-1 tem nos linfócitos T CD4 suas principais células alvo. Entretanto, células da linhagem mieloide também podem se infectar pelo HIV-1 através da interação com receptores CD4, CCR5 e CXCR4. Macrófagos podem sobreviver infectados por longos períodos e apresentam compartimentos contendo vírus (VCCs), onde HIV-1 se acumula e se mantém infectivo. Por essas razões, macrófagos se apresentam como reservatórios virais em potencial. Por outro lado, células dendríticas (DCs) raramente se infectam pelo HIV-1, mas são capazes de capturar vírus e mantê-los em compartimentos onde não são degradados. São capazes ainda de realizar transferência viral para células T CD4 através do processo de trans-infecção. A captura de HIV-1 por DCs maduras na trans-infecção é mediada por uma proteína de superfície, denominada Siglec1, que se liga ao ácido siálico de gangliosídeos no envelope viral. Siglec1 também é expresso por macrófagos, e sua importância nessas células vem sendo relacionada com a formação de VCCs. Todavia, os mecanismos moleculares de internalização e sinalização envolvendo esta lectina ainda não estão bem elucidados. Ainda não se sabe se existem proteínas que auxiliem Siglec1 nesses processos. Portanto, neste trabalho, tivemos como objetivo a identificação de proteínas com potencial de interação com Siglec1, em DCs e em macrófagos, após incubação com HIV-1. Para isso, foram realizados experimentos de co-imunoprecipitação de Siglec1 a partir de lisado de DCs e macrófagos derivados de monócitos humanos após incubação com partículas semelhante a vírus de HIV-1. As proteínas co-imunoprecipitadas obtidas por espectrometria de massas foram identificadas e após processos de mineração in sílico dos dados foi possível demonstrar que o citoesqueleto celular e suas proteínas associadas parecem desempenhar importante papel no auxílio ao Siglec1 na captura e internalização do HIV-1. Após análises por espectrometria de massas, algumas dessas proteínas identificadas foram validadas por Western Blotting e microscopia de fluorescência. A compreensão desses mecanismos moleculares envolvidos na interação de Siglec1 com HIV-1 poderá abrir caminho para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas focando na dispersão do vírus pelas DCs e nos reservatórios em macrófagos.

HIV-1 has CD4 lymphocytes as its main target cells. However, myeloid cells can also become infected with HIV-1 through interaction with CD4, CCR5 and CXCR4 receptors. Macrophages can survive infected for long periods and present compartments containing viruses (VCCs), where HIV-1 accumulates and remains infectious. For these reasons, macrophages may be potential viral reservoirs. On the other hand, dendritic cells (DCs) rarely become infected with HIV-1, but are able to capture viruses and keep them in compartments where they are not degraded. DCs are also able to perform viral transfer to CD4 T cells through the trans-infection process. The capture of HIV-1 by mature DCs during trans-infection is mediated by a surface protein, Siglec1, which binds to ganglioside sialic acid in the viral envelope. Siglec1 is also expressed by macrophages, and its importance in these cells has been linked to the formation of VCCs. However, the molecular mechanisms of internalization and signaling involving the lectin Siglec1 are still not well understood. It is not yet known if there are proteins that help Siglec1 in these processes. Therefore, in this work, we aimed to identify proteins with potential for interaction with Siglec1, in DCs and macrophages, after incubation with HIV-1. For that, co-immunoprecipitation experiments were performed from lysate of DCs and macrophages derived from human monocytes after incubation with HIV-1 virus-like particles. Co-immunoprecipitated proteins obtained by mass spectrometry were identified and after in silico analysis of the data, it was possible to demonstrate that the cell cytoskeleton and its associated proteins appear to play an important role in helping Siglec1 in the capture and internalization of HIV-1. After mass spectrometry analysis, some of the proteins identified were validated by Western Blotting and fluorescence microscopy. Understanding the molecular mechanisms involved in the interaction of Siglec1 with HIV-1 may pave the way for the development of new therapeutic strategies focusing on the dispersion of the virus by DCs and reservoirs in macrophages.