O mosquito Aedes aegypti é um inseto hematófago conhecido por ser vetor de arbovírus de grande importância na saúde pública. Sua saliva é composta por ampla gama de moléculas com atividades anti-hemostáticas e imunomoduladoras, dentre as quais foi identificada uma citotoxicidade seletiva para linfócitos. Considerando a diversidade de mecanismos de morte celular regulada descritos na literatura, uma compreensão mais aprofundada do processo desencadeado pela saliva em linfócitos é necessária. As consequências dessa citotoxicidade também carecem de esclarecimentos, incluindo a investigação sobre a possível eferocitose das células em processo de morte. Assim, o objetivo deste trabalho foi caracterizar a morte de linfócitos induzida pela saliva de Ae. aegypti e avaliar a possível eferocitose decorrente desse processo. Para isso, baços murinos foram usados como fonte de linfócitos, os quais foram incubados com extrato da glândula salivar (EGS) de Ae. aegypti para as avaliações subsequentes. Identificamos, inicialmente, que o EGS inibiu a linfoproliferação de linfócitos induzida por concanavalina A e foi capaz de alterar a topografia da membrana das células afetadas. Essas alterações ocorreram como consequência da morte de linfócitos, um efeito causado por moléculas termolábeis com massa molecular superior a 100 kDa. Notamos ainda que a atividade de caspases, em especial caspase-3, é importante para o desenvolvimento desse fenômeno, que afetou células T e B de maneiras diferentes. Enquanto células B apresentam um perfil de morte mais próximo ao da apoptose clássica, mantendo a estrutura da membrana sem liberar lactato desidrogenase (LDH), as células T parecem ser mais sensíveis à ação citotóxica, visto que essas células liberam LDH e diminuem em número ao longo das primeiras 24 horas de cultura. Apesar dessas características, a morte celular induzida pelo EGS não parece ser dependente de caspase-1 ou gasdermina D, demonstrando não induzir a ativação das vias canônica ou não canônica da piroptose. Mesmo com os efeitos observados in vitro , ensaios in vivo não demonstraram diferenças significativas na morte de linfócitos da pele de camundongos expostos à picada do mosquito. Além disso, não fomos capazes de detectar influência da morte induzida pelo EGS no processo de eferocitose por células dendríticas derivadas da medula óssea, nem na maturação ou liberação de citocinas por essas células. Acreditamos, contudo, que o processo de morte seletiva induzida pelo EGS de Ae. aegypti pode ajudar a ampliar o conhecimento sobre o microambiente criado pela saliva na pele do hospedeiro e contribuir para o desenvolvimento de estratégias de combate ao mosquito e aos patógenos por ele transmitidos.

Aedes aegypti mosquito is a hematophagous insect known as the vector of arboviruses of great importance in public health. Its saliva is composed of a wide range of molecules with anti-hemostatic and immunomodulatory activities, among which a selective cytotoxicity for lymphocytes has been identified. Considering the diversity on the regulated cell death mechanisms described in the literature, a deeper understanding of the process triggered by saliva on lymphocytes is needed. The consequences of this cytotoxicity also ask for clarification, including the investigation on the possible efferocytosis of the dying cells. Thus, the goal of this work was to characterize the Ae. aegypti saliva-induced lymphocyte death in more details, and to evaluate whether efferocytosis results from this process. For this, total spleen cells from mice were used as a source of lymphocytes and incubated with Ae. aegypti salivary gland extract (SGE) for further evaluations. We observed that EGS inhibited concanavalin A-induced lymphocyte proliferationand it was able to alter the membrane topography of the affected cells. These changes occurred as a consequence of lymphocyte death, an effect caused by thermolabile molecules with molecular mass higher than 100 kD. We also noted that caspases activity, especially caspase-3, is important for the development of this phenomenon, which affected T and B cells in different ways. While B cells present a death profile similar to classical apoptosis, maintaining the membrane structure without releasing lactate dehydrogenase (LDH), T cells appear to be more sensitive to the cytotoxic action, as these cells release LDH and decrease in number over the first 24 hours culture. Despite these features, EGS-induced cell death does not seem to be dependent on caspase-1 or gasdermin D, rulling out the activation of the canonical or non-canonical pyroptosis pathways. Even considering the in vitro observed effects, in vivo assays did not evidenced significant differences in lymphocytes death from the skin of mice exposed to mosquito bites. Furthermore, we were not able to detect the influence of EGS-induced death on the efferocytosis process by bone marrow-derived dendritic cells, nor on the maturation or release of cytokines by these cells. We believe, however, that the process of selective death induced by Ae. aegypti SGE can help understand the microenvironment created by saliva on the hosts skin and contribute to the development of strategies to fight the mosquito and the pathogens it transmits.