Uma indução eficiente de células T CD8+ antígeno-específicas efetoras e de longa duração, através de estratégias de vacinação, é essencial para eliminar células tumorais ou infectadas por patógenos. Bactérias intracelulares infectantes tais como Listeria monocytogenes, têm sido consideradas potentes vetores para expressão de diversas proteínas terapêuticas, uma vez que tem a capacidade de gerar uma forte resposta mediada por células T CD8+ antígeno-específica. Embora o papel de moléculas envolvidas nas vias de sinalização de morte celular, tais como, RIPK3 (necroptose) e Caspase-1/11 (piroptose), na resposta imune efetora contra bactérias intracelulares, ser relativamente bem entendida, a contribuição, como efeito adjuvante, dos vetores bacterianos recombinantes no contexto da resposta T CD8+ antígeno-específica ainda não foi esclarecido. Dessa forma, foi avaliado o impacto da deficiência individual e combinada de RIPK3 e Caspase-1/11 (Casp-1/11) na modulação da resposta mediada por células T CD8+ antígeno-específica, durante a vacinação de camundongos com Listeria monocytogenes expressando ovalbumina (LM-OVA). Foi observado que a deficiência de Casp-1/11, mas não de RIPK3, impacta negativamente na capacidade dos camundongos de eliminar LM-OVA. De maneira importante, ambos RIPK3 e Casp-1/11 são necessários para uma resposta T CD8+ antígeno-específica de boa qualidade contra LM-OVA, conforme medido pela proliferação in vivo de células T CD8+ antígeno-específica, eliminação de células alvo e produção de citocinas. Ainda, deficiência combinadas de Casp-1/11 e Casp-1/11/RIPK3 restringe a estimulação de células T CD8+ antígeno-específicas de memória. Assim, nossos achados demonstraram que RIPK3 e Casp-1/11 influencia na qualidade das respostas de células T CD8+ antígeno-específicas induzidas por vetores recombinantes de L. monocytogenes. Interessantemente, a redução de células T CD8+ OVA-específicas encontradas em ambos os camundongos RIPK3-/- e Casp-1/11-/- infectados com LM-OVA resultou na deficiência em eliminar células B16.OVA de melanoma somente em Casp-1/11-/- e Casp1/11-/-/RIPK3-/-. Assim, nossos achados podem ajudar a otimizar uma imunoterapia de LM-OVA ou outra estratégia terapêutica baseada em vetores vivos.

An efficient induction of effector and long-term protective antigen-specific CD8+ T memory response by vaccination is essential to eliminate malignant and pathogen-infected cells. Intracellular infectious bacteria, including Listeria monocytogenes, have been considered potent vectors to carry multiple therapeutic proteins and generate antigen-specific CD8+ T cell responses. Although the role of molecules involved in inflammatory cell death pathways, such as necroptosis (RIPK3-mediated) and pyroptosis (Caspase-1/11-mediated), as effectors of immune response against intracellular bacteria are relatively well understood, their contribution to the adjuvant effect of recombinant bacterial vectors in the context of antigen-specific CD8+ T cell response remained obscure. Therefore, we evaluated the impact of RIPK3 and Caspase-1/11 (Casp-1/11) individual and combined deficiencies on the modulation of antigen-specific CD8+ T cell response during vaccination of mice with ovalbumin-expressing Listeria monocytogenes (LM-OVA). We observed that Casp-1/11 but not RIPK3 deficiency negatively impacts the capacity of mice to clear LM-OVA. Importantly, both RIPK3 and Casp-1/11 are necessary for optimal LM-OVA-mediated antigen-specific CD8+ T cell response, as measured by in vivo antigen-specific CD8+ T cell proliferation, target cell elimination and cytokine production. Furthermore, Casp-1/11 and Casp-1/11/RIPK3 combined deficiencies restrict the early initiation of antigen-specific CD8+ T cell memory response. Together our findings demonstrate that RIPK3 and Casp-1/11 influence the quality of CD8+ T cell responses induced by recombinant L. monocytogenes vectors. Interestingly, the reduction of OVA-specific CD8+ T cell response found in both RIPK3-/- and Casp1/11-/- mice infected with LM-OVA results in a deficiency to eliminate B16.OVA melanoma cells only in Casp1/11-/- and Casp1,11-/-/RIPK3-/-. Furthermore, our findings may help to optimize the immunotherapeutic potential of LM- or other live vector-based vaccination strategies.