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Mémoire de Maîtrise
DOI
https://doi.org/10.11606/D.42.2022.tde-15022023-163856
Document
Auteur
Nom complet
Sarah Cristina Gozzi e Silva
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2022
Directeur
Jury
Sato, Maria Notomi (Président)
Bargieri, Bruna Cunha de Alencar
Rosa, Daniela Santoro
Santos, Keity Souza
Titre en portugais
Análise de células Natural Killer de memória e da resposta antiviral de células T CD8+ na infecção por SARS-CoV-2
Mots-clés en portugais
fatores antivirais
linfócitos T
NK de memória
SARS-CoV-2
Resumé en portugais
A COVID-19, doença infecciosa causada pelo SARS-CoV-2, disseminou-se em escala pandêmica. A infecção pelo vírus pode evoluir de maneira assintomática ou gerar sintomas mais graves, influenciada pela presença de comorbidades. A linfopenia nos pacientes acometidos com a COVID-19 de acordo com a gravidade dos sintomas é recorrente, incluindo diminuição da frequência de células NK (Natural Killers). Contudo, o perfil de células T CD4+ , T CD8+ e NK quanto a funcionalidade ainda não bem foram elucidados na infecção aguda pelo SARS-CoV-2. A proposta deste estudo é avaliar o perfil fenotípico e funcional de linfócitos T e células NKs, incluindo células NK de memória, em pacientes com quadro moderado e grave/crítico de COVID-19. No período de pandemia, iniciamos as análises em uma coorte de 79 pacientes confirmados com SARS-CoV-2 (31 casos moderados e 48 casos graves/críticos) procedentes do HC-FMUSP. Observamos nesta coorte prevalência de óbito de 6,5% nos quadros moderados e de 31,3% nos quadros graves. As comorbidades mais prevalentes foram hipertensão arterial sistêmica e distúrbios cardíacos. Apesar da linfopenia, evidenciamos aumento da expressão de marcadores de ativação em linfócitos T (CD28, CD38 e HLA-DR), assim como aumento da frequência de células T CD4+ , T CD8+ e células NK que expressam a proteína de checkpoint imunológico, PD-1, nos pacientes com quadro grave/crítico em relação aos controles. Em contraste com a diminuição percentual de células NK, houve aumento da frequência de NK de memória, NKG2C+ CD57+ , tanto nos casos moderados quanto graves/críticos da infecção. Já no tecido cutâneo de pacientes que foram a óbito em decorrência da doença, detectamos na região dérmica aumento da expressão de NKG2C e granzima. Considerando que a expansão desta população está relacionada com a exposição ao citomegalovírus (CVM), houve elevação dos títulos de anticorpos IgG anti-CMV nos pacientes com COVID-19, que se normalizou nos indivíduos convalescentes. Quanto ao perfil citotóxico das células mononuclares do sangue periférico, já na condição basal, foi observado aumento da resposta de células TCD4+ e NK, entretanto com o estímulo com PMA e Ionomicina pouco se alterou. Já os linfócitos T CD8+ mostraram diminuição da resposta citotóxica, evidenciando um perfil de exaustão nos pacientes com COVID-19 grave. Além disto, foi evidenciado aumento da expressão constitutiva de genes associados a via das caspases, inflamassoma e fatores antivirais em linfócitos T CD8+ purificados de pacientes com COVID-19 grave, e redução da expressão de TNF- α. O perfil citotóxico, por células NK de memória e células T CD4+ citotóxicas, pode compensar a disfunção/exaustão das T CD8+ , contudo presença de células com potencial citotóxico foram detectadas na derme de autopsias de pacientes COVID-19. Estes achados podem fornecer um maior entendimento dos fatores associados a gravidade da infecção aguda por COVID-19.
Titre en anglais
Analysis of Natural Killer memory cells and the antiviral response of CD8+ T cells in SARS-CoV-2 infection
Mots-clés en anglais
antiviral factors
memory NK
SARS-CoV-2
T lymphocytes
Resumé en anglais
COVID-19, an infectious disease caused by SARS-CoV-2, has spread on a pandemic scale. The virus infection can evolve asymptomatically or generate more severe symptoms, influenced by the presence of comorbidities. Lymphopenia in patients affected with COVID-19 according to the severity of symptoms is recurrent, including a decrease in the frequency of NK cells (Natural Killers). However, the profile of CD4+ T, CD8+ T and NK cells in terms of functionality has not yet been well elucidated in acute SARS-CoV-2 infection. The purpose of this study is to evaluate the phenotypic and functional profile of T lymphocytes and NK cells, including memory NK cells, in patients with moderate and severe/critical COVID-19. During the pandemic period, we started analyzing a cohort of 79 patients confirmed with SARS-CoV-2 (31 moderate cases and 48 severe/critical cases) from HC-FMUSP. In this cohort, we observed a death prevalence of 6.5% in moderate cases and 31.3% in severe cases. The most prevalent comorbidities were systemic arterial hypertension and cardiac disorders. Despite lymphopenia, we observed an increase in the expression of activation markers in T lymphocytes (CD28, CD38 and HLA-DR), as well as an increase in the frequency of CD4+ T cells, CD8+ T cells and NK cells that express the immunological checkpoint protein, PD- 1, in patients with severe/critical condition compared to uninfected. In contrast to the percentage decrease in NK cells, there was an increase in the frequency of memory NK, NKG2C+ CD57+ , both in moderate and severe/critical cases of infection. In the skin tissue of patients who died as a result of the disease, we detected an increase in the expression of NKG2C and granzyme in the dermal region. Considering that the expansion of this population is related to exposure to cytomegalovirus (CVM), there was an increase in anti-CMV IgG antibody titers in patients with COVID-19, which normalized in convalescent individuals. As for the cytotoxic profile of peripheral blood mononuclear cells, in the basal condition, an increase in the response of TCD+ 4 and NK cells was observed, however with the stimulation with PMA and Ionomycin little changed. On the other hand, CD8+ T lymphocytes showed a decrease in the cytotoxic response, evidencing a profile of exhaustion in patients with severe COVID-19. In addition, increased constitutive expression of genes associated with the caspase pathway, inflammasome and antiviral factors in purified CD8+ T lymphocytes from patients with severe COVID-19, and reduced expression of TNF-a. The cytotoxic profile, by memory NK cells and cytotoxic CD4+ T cells, can compensate for the dysfunction/exhaustion of CD8+ T cells, however the presence of cells with cytotoxic potential were detected in the dermis of autopsies of COVID-19 patients. These findings may provide a greater understanding of factors associated with the severity of acute COVID-19 infection.
 
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Date de Libération
2025-02-14
Date de Publication
2023-02-16
 
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