As miosinas são motores moleculares associados à actina. As miosinas convencionais do tipo II estão presentes em todas as células nucleadas e são essenciais durante o processo da sinapse imunológica. Por outro lado, as miosinas não-convencionais estão presentes em diversos tipos celulares, inclusive células T, onde já foi visto que estão diretamente relacionadas à migração celular. Entretanto, pouco se sabe sobre seu papel na ativação antigênica desses linfócitos. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar o papel das miosinas não convencionais expressas em linfócitos T (myo IC, myo IG, myo VA, myo IXA, myo IXB e myo XVIIIA), na ativação dessas células. Para tal, silenciamos cada uma dessas miosinas utilizando RNAi em células de linhagem Jurkat (uma linhagem celular de TCD4+ humana). Para as miosinas cujo silenciamento foi significante (myo IG e IC) avaliamos se a ativação das células silenciadas era similar à ativação observada em células controle. Em resposta à ativação usando anti-CD3/anti-CD28, as células silenciadas para a myo IC apresentaram expressão de CD69 e produção de IL-2 semelhantes aos observados nas células controle. Já as células silenciadas para a myo IG, observamos redução tanto na expressão da molécula CD69 quanto na produção de IL-2 no sobrenadante. Por outro lado, essas alterações não foram observadas após ativação com PMA/IONO, sugerindo um papel para a myo IG nas etapas iniciais da ativação. Corroborando esses dados, a myo IG foi observada nas regiões de contato célula-célula em sinapses imunológicas de células Jurkat com células dendríticas pulsadas com superantígenos. A análise da expressão das moléculas CD3 e CD28 na superfície das células Jurkat silenciadas para myo IG mostrou alterações, que, porém, divergiram dependendo da sequência de shRNA utilizada. Por outro lado, células Jurkat knockout para myo IG pelo sistema CRIPR/Cas9 não mostraram alteração da ativação e nem da expressão de receptores. Nossos dados sugerem um possível papel para essa miosina na ativação dos linfócitos T CD4, porém mais estudos serão necessários para definir o papel exato da myo IG na ativação das células Jurkat.

Myosins are actin-associated molecular motors. Conventional type II myosins are present in all nucleated cells and are essential during the process of the immunological synapse. On the other hand, unconventional myosins are present in only a few cell types, such as T cells, where it has already been seen that they are directly related to cell migration. However, little is known about their role in intracellular events. Therefore, this work aims to evaluate the role of the unconventional expression in T lymphocytes (myo IC, myo IG, myo VA, myo IXA, myo IXB e myo XVIIIA), in the activation of these cells. For that, we silenced each of these myosins using RNAi in Jurkat cells (a human CD4+ T cell line). For myosins whose silencing was significant (myo IG and IC) we evaluated whether the activation of silenced cells was similar to the activation observed in control cells. In response to activation using anti-CD3/anti-CD28, myo IC silenced cells showed CD69 expression and IL-2 production similar to those observed in control cells. As for the MYO1G-silenced Jurkats, expressed lower levels of CD69 on their surface than cells expression and in the production of IL-2 in the supernatant. On the other hand, these changes were not observed after activation with PMA/IONO, suggesting a role for Myo1g in the initial steps of activation. Corroborating these data, myo1g was observed in the cell-cell contact regions in immunological synapses of Jurkat cells with dendritic cells pulsed with superantigens. Analysis of the expression of CD3 and CD28 molecules on the surface of Jurkat cells silenced for myo IG showed alterations, that, although, diverged depending on the shRNA sequence used. However, myo IG knockout Jurkat cells by the CRIPR/Cas9 system did not show changes in activation or expression of receptors. Our data suggest a possible role for this myosin in the activation of CD4 T lymphocytes, but further studies are needed to define the exact role of myo IG in the activation of Jurkat cells.