Nanoestruturas poliméricas catiônicas possuem características de interesse no design de novas vacinas, devido às suas propriedades físico-químicas e potencial estimulador de resposta imune. Neste contexto, as propriedades imunoestimuladoras do cloreto de poli(dialildimetilamônio), polímero que mantém sua carga positiva no pH 6,3 da água e é capaz de conjugar-se à ovalbumina (OVA), têm sido avaliadas. Resultados prévios mostraram que animais imunizados com OVA/PDDA apresentam resposta imune humoral e celular OVA-específica. Portanto, analisamos no presente estudo a atividade das NPs de OVA/PDDA sobre a célula dendrítica (DC) e a indução da resposta imune adaptativa OVA-específica. A formação das nanopartículas (NPs) de OVA/PDDA foi conrmada apresentando elevada turbidez, baixo índice de polidispersão e diâmetro hidrodinâmico médio de 178 nm. Em experimento de imunização de camundongos com OVA/PDDA ou OVA/Alum, pudemos verificar a indução de resposta celular OVA-específica (reação de hipersensibilidade tardia - DTH no 7° dia pós-imunização) e produção de anticorpos IgG1 e IgG2a anti-OVA avaliadas nos dias 21 e 28 pós-imunização em relação aos não-imunizado. A imunização com OVA/PDDA induziu maior reação de DTH e produção de anticorpos em relação à imunização com OVA/Alum. Após 28 dias de imunização dos animais com OVA/PDDA houve aumento de células CD19CD138+ e CD19+CD38+CD27+, além de células T efetoras polarizadas para Th1 e Th2. Os resultados in vivo também mostraram aumento da migração de DCs para o tecido linfóide drenante, assim como aumento da maturação desta população celular nos animais imunizados com OVA/PDDA. Também vericamos que a imunização com OVA/Alum induziu a maturação das DCs in vivo. Em experimentos in vitro com DCs diferenciadas de medula óssea de camundongos (BM-DCs), vericamos que as NPs de OVA/PDDA (100g/10g/mL) não apresentaram atividade citotóxica. Outros resultados mostraram maior ligação e internalização de OVA/PDDA pelas DCs em relação à OVA. Os dados mostraram também, que OVA/PDDA foi capaz de induzir a maturação das DCs in vitro quando observada a expressão das moléculas coestimuladoras 11 (CD80, CD86 e CD40) e de MHC de classe II, assim como a incubação com OVA/LPS. A produção de TNF- e IL-12 pelas DCs também foi induzida após incubação com OVA/PDDA. Além disso, DCs previamente incubadas com OVA/PDDA induziram a proliferação de linfócitos T OVA-especícos em ensaio de co-cultura. Em conjunto, os resultados permitiram conrmar o potencial adjuvante de OVA/PDDA in vivo e ainda, vericar a capacidade das NPs de ativar as DCs in vivo e in vitro. Assim sendo, os resultados contribuem para o entendimento da ação do polímero catiônico conjugado à OVA (OVA/PDDA) sobre a resposta imune celular e humoral, desde sua potencial ação sobre sobre as DCs.

Cationic polymeric nanostructures have been the focus of design of new vaccines due to their physicochemical properties. Therefore, it has been studied the immunostimulatory properties of poly(diallyldimethylammonium chloride), a polymer that maintains its positive charge at pH 6.3 in water and is able to conjugate with ovalbumin (OVA) through the difference in charges. Previous results showed that mice immunized with OVA/PDDA induce a potent cellular OVA-specific immune response and high levels of anti-OVA antibodies. In this work, we aimed to investigate the modulatory effect of OVA/PDDA on dendritic cell (DC) and adaptive immune response against OVA. The formation of the OVA/PDDA-NPs was confirmed presenting high turbidity, low polydispersion index and mean hydrodynamic diameter of 178 nm. In in vivo experiments of mice immunized with OVA/PDDA or OVA/Alum, we observed an induction of DTH reaction elicited by the injection of aggregated OVA in the footpad (day 7 of the immunization) and production of anti-OVA IgG1 and IgG2a after 21 and 28 days of immunization compared with control mice. The DTH reaction and antibody production were higher in OVA/PDDA immunized mice compared with the OVA/Alum group. Furthermore, the results showed enhancement of CD19+CD138+ and CD19+CD38+CD27+, in addition to increased T cell Th1 and Th2 profile response after 28 days of immunization with OVA/PDDA. The results also showed that OVA/PDDA induced DCs migration to draining lymph nodes, as well as the induction of DCs maturation. We also verified that OVA/Alum immunization also induced DCs maturation in vivo. In in vitro experiments developed with BM-DCs, OVA/PDDA-NPs didnot induce a cytotoxic effect. Higher binding and uptake of OVA/PDDA-NPs by BM-DCs were verified compared with OVA soluble. The data also showed that OVA/PDDA was able to induce DCs maturation by analyzing the expression of molecules involved in antigen presentation and MHC-II, as observed with OVA/LPS stimulation. The production of TNF-a e IL-12 by DCs was induced by OVA/PDDA. Furthermore, DCs previously incubated with OVA/PDDA induced OVA-specic T cell proliferation in vitro . Taken together, the data allow us to confirrm the potential of OVA/PDDA-NPs to induce adaptive response in vivo and also, to verify the ability of this formulation to activate DCs in vivo and in vitro . Thus, the results contribute to the understanding of the action of OVA/PDDA-NPs on the immune system, initiating on DCs.