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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.42.2011.tde-25102011-135001
Documento
Autor
Nome completo
André Andrade Baceti
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2011
Orientador
Banca examinadora
Schneider, Rene Peter (Presidente)
Nakayama, Cristina Rossi
Sato, Maria Inês Zanoli
Título em português
Construção de biossensor para detecção de compostos BTEX baseado em fosfatase alcalina sob regulação xylR/Pu e avaliação de sua regulação metabólica.
Palavras-chave em português
Bioquímica microbiana
Compostos aromáticos
Metabolismo (microbiologia)
Microbiologia ambiental
Plasmídeos
Resumo em português
Este projeto teve como objetivo a construção de biosensores para a detecção de compostos monoaromáticos do grupo BTEX a partir dos componentes da via de degradação de compostos monoaromáticos codificada no plasmídeo TOL de Pseudomonas putida, mais precisamente: o promotor Pu e a proteína reguladora XylR, que ativa o promotor Pu após a ligação ao efetor monoaromático. Um objetivo secundário foi a verificação da existência de sequências reguladoras desconhecidas a montante do promotor Pu, construindo três variantes com fragmentos de Pu que se estendem por diferentes comprimentos a montante do promotor (Pu202 pb, Pu396 pb e Pu802 pb), cuja existência foi sugerida em trabalho anterior do laboratório. O promotor Pu foi ligado ao gene indicador para fosfatase alcalina isolado de E. coli. Todos os componentes das três variantes de biossensores foram clonados com sucesso. A construção de um dos plasmídeos de biossensoramento com a variante mais curta de Pu (Pu202) foi concluída.
Título em inglês
Construction of a biosensor for BTEX compounds detection based on alkaline phosphatase in regulation xylR/Pu and evaluation of its metabolic regulation.
Palavras-chave em inglês
Aromatic compounds
Environmental microbiology
Metabolism (microbiology)
Microbial biochemistry
Plasmids
Resumo em inglês
Monoaromatic compounds are mainly responsible for the contamination of areas, this is because they are components of gas and the fuel stations most of accidents sites. Such compounds are highly toxic and, in between non-polar compounds, present high solubility and vapor pressure which assists them in dispersion at groundwaters and soil. This work aim to develop a biosensor based on alkaline phosphatase indicator gene under the regulation of the Pu promoter and its regulatory protein, XylR, that is activated by monoaromatic. Moreover, this work will continue a previous project of the research group that indicated a possible regulatory region not described for Pu, that hypothesis will be tested by producing different plasmids biosensors with varying sizes of Pu (202 bp, 396 bp and 802 bp). All biosensor fragments were purified and cloned on pGem T Easy and biosensor with Pu 202 pb was produced. Next goals are finishing others biosensors assemble and perform induction tests.
 
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Data de Publicação
2011-11-11
 
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