• JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
 
  Bookmark and Share
 
 
Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.42.2020.tde-19012022-172820
Documento
Autor
Nome completo
Tania Geraldine Churasacari Vinces
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2020
Orientador
Banca examinadora
Carvalho, Cristiane Rodrigues Guzzo (Presidente)
Favaro, Denize Cristina
Gomez, José Gregorio Cabrera
Ramos, Carlos Henrique Inacio
Título em português
Caracterização funcional de uma nova esterase de solo escuro da Amazônia com comportamento histerético.
Palavras-chave em português
Caraterização bioquímica
Cinética enzimática
Quorum quenching
Resumo em português
No presente estudo, caracterizamos bioquimicamente uma nova enzima com atividade esterase membro da superfamília α/β-hidrolase obtida de uma biblioteca metagenômica de solo escuro da Amazônia. Essa enzima foi nomeada como Amazonian Dark Earth Esterase 1 (Ade1). Ade1 hidrolisa ligações éster de diferentes substratos como: tributirina (cadeia alifática com 3 carbonos), Tween 20 (cadeia alifática com 11 carbonos), p-nitrofenil butirato (cadeia alifática com 4 carbonos), e p-nitrofenil octanoato (cadeia alifática com 8 carbonos) e N-hexanoil-L-homoserina lactona (C6-HSL, cadeia alifática com 6 carbonos) onde Ade1 atua interrompendo o quórum sensing pela sua capacidade de hidrolisar o autoindutor N-hexanoyl homoserine lactone, processo conhecido como quórum quenching. Dessa forma, Ade1 mostra um grau de promiscuidade em sua atividade enzimática pela sua capacidade de hidrolisar ligações ésteres de diferentes moléculas cuja estereoquímica permita coloca-la/seu ingresso no bolsillo catalítico no não seja volumosa. Ade1 é um monómero que apresento um perfil sigmoidal evidente nos ensaios de cinética, conhecido como comportamento histerético com perfil transitório tipo burst, o que já foi reportado para outras enzimas lipolíticas. Analise de dinâmica molecular mostra que Ade1 tem dois estados conformacionais: E1 e E2 cujo equilíbrio foi dependente da concentração do substrato. Alem, a atividade enzimática de Ade1 foi influenciada pela presencia de cobalto. O estado E2 possui uma maior velocidade de hidrólise de p-nitrofenil octanoato do que o estado E1. Ade1 pode ser uma enzima com interesse biotecnológico por poder modular quorum quenching em algumas bactérias que tem C6-HSL como autoindutor.
Título em inglês
Functional characterization of a new dark soil esterase from Amazon with hysterical behavior.
Palavras-chave em inglês
Biochemical characterization
Enzymatic kinetics
Quorum quenching
Resumo em inglês
In the present study, we biochemically characterized a new enzyme with esterase activity that is a member of the α/β-hydrolase superfamily from a metagenomic library of dark soil in the Amazon. This enzyme was named as Amazonian Dark Earth Esterase 1 (Ade1). Ade1 hydrolyses ester bonds from different substrate such as: tributyrin (aliphatic chain with 3 carbons), Tween 20 (aliphatic chain with 11 carbons), p-nitrophenyl butyrate (aliphatic chain with 4 carbons), and p-nitrophenyl octanoate (aliphatic chain with 8 carbons) and N-hexanoyl-L-homoserine lactone (C6-AHL, aliphatic chain with 6 carbons) where Ade1 interrupts the quorum sensing by its ability to hydrolyze C6-HSL autoinducer. Thus, Ade1 shows a degree of promiscuity in its enzymatic activity due to its ability to hydrolyze ester bonds of different molecules whose stereochemistry is not bulky. Ade1 is a monomer that has a sigmoidal profile evident in kinetic test, known as hysteretic behavior with a burst profile, which has already been reported for other lipolytic enzymes. Molecular dynamics analysis shows that Ade1 has two conformational states: E1 and E2 whose equilibrium depend on the substrate concentration. In addition, the enzymatic activity of Ade1 was influenced by the presence of cobalt. The E2 state has a higher hydrolysis rate of p-nitrophenyl octanoate than the E1 state. Ade1 can be an enzyme with biotechnological interest because it can modulate quorum quenching in some bacteria that have C6-HSL as an autoinducer.
 
AVISO - A consulta a este documento fica condicionada na aceitação das seguintes condições de uso:
Este trabalho é somente para uso privado de atividades de pesquisa e ensino. Não é autorizada sua reprodução para quaisquer fins lucrativos. Esta reserva de direitos abrange a todos os dados do documento bem como seu conteúdo. Na utilização ou citação de partes do documento é obrigatório mencionar nome da pessoa autora do trabalho.
Data de Liberação
2024-01-19
Data de Publicação
2022-12-02
 
AVISO: Saiba o que são os trabalhos decorrentes clicando aqui.
Todos os direitos da tese/dissertação são de seus autores
CeTI-SC/STI
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP. Copyright © 2001-2024. Todos os direitos reservados.