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Master's Dissertation
DOI
https://doi.org/10.11606/D.42.2021.tde-04032022-164316
Document
Author
Full name
Cairo Monteiro de Oliveira
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2021
Supervisor
Committee
Durigon, Edison Luiz (President)
Camargo, Erney Felicio Plessmann de
Luiz, Wilson Barros
Pierulivo, Enrique Mario Boccardo
Title in Portuguese
Monitoramento e caracterização molecular de arbovírus em dípteros da Amazônia ocidental brasileira (estado de Rondônia e Amazonas).
Keywords in Portuguese
Arbovirus
Dipteros
RT-qPCR
Sybr Green
Abstract in Portuguese
Introdução: Arbovírus são vírus transmitidos por vetores artrópodes que predominam nas áreas tropicais do mundo. O território brasileiro é tomado por florestas tropicais e ecossistemas que permitem condições ideais à presença de Arbovírus. Inúmeros arbovírus já foram detectados e isolados no território brasileiro, tais como o vírus da Dengue, Zika vírus, Chikungunya e muitos outros que circulam na natureza por intermédio de hospedeiros reservatórios e vetores artrópodes, tais como dípteros, carrapatos, etc que frequentemente causam surtos de doenças em animais e humanos. Nesse contexto, os estados de Rondônia e Amazonas que detém parte de seus territórios coberto por floresta amazônica, apresentam ecossistema que favorece a existência de diferentes espécies de vetores artrópodes que junto às ações antropogênicas e as precárias condições de saneamento básico, permitem potencial transmissão e estabelecimento de arboviroses nestas regiões. Objetivo: O presente trabalho tem como objetivo monitorar a presença de Arbovírus de importância médica, tais como Flavivirus, Alphavirus e Bunyavírus em espécies de dípteros coletados nos estados de Rondônia e Amazonas, Brasil. Métodos: Neste estudo, foi padronizado três ensaios de RT-qPCR (Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction) com Sybr Green para detecção de Arbovírus (Flavivirus, Alphavirus e Bunyavirus). Além disso, espécies de dípteros foram capturados em diferentes regiões ao longo do estado de Rondônia e Amazonas, entre os anos de 2017, 2018 e 2019, e após um processo de maceração e extração de ácidos nucleicos, foram submetidos à pesquisa de Arbovírus utilizando os protocolos padronizados. Resultados: Os ensaios se mostraram eficazes para pesquisa de Arbovirus de interesse. Até o momento, dos 9.299 dípteros coletados, foram processados e analisados cerca de 6798 dípteros, dos quais: 69,46% (n=4714) pertencem à família Culicidae, 15,5% (n=1050) a Ceratopogonidae, 8,2% (n=555) a Psychodidae, 6,8% (462) a Tabanidae e 0,04% (n=3) a Simullidae, divididos em mais de 35 espécies distintas. Do total de dípteros analisados não foi detectado Flavivirus, Alphavirus ou Bunyavírus. Conclusão: Apesar da boa eficiência dos protocolos, não houve detecção de arbovírus nos pools de mosquitos analisados. Este trabalho fornece dados importantes à respeito da atual situação epidemiológica brasileira, principalmente nos possíveis focos de transmissão e disseminação desses vírus, sem que seja descartado a potencial circulação nas regiões estudadas.
Title in English
Monitoring and molecular characterization of arbovirus in Dípteros of western Brazilian Amazonia (State of Rondônia and Amazonas).
Keywords in English
Arbovirus
Diptera
RT-qPCR
Sybr Green
Abstract in English
Arboviruses are viruses transmitted by arthropod vectors that predominate in tropical areas of the world. The brazilian territory taken by tropical forests and other natural ecosystems that allow ideal conditions for the presence of Arbovirus. A number of Arboviruses have already been detected and isolated throughout the territory with many still endemic such as Dengue virus (DENV), Zika virus (ZKV), Chikungunya virus (CHIKV) and many others circulating in nature through reservoir hosts and arthropod vectors such as dipterans, ticks, etc. which often cause disease outbreaks in animals and humans. In this context, the states of Rondônia and Amazonas, which owns part of its territories covered by amazon forest have an ecosystem that favors the existence of different species of arthropod vectors that together with anthropogenic actions and poor basic sanitation conditions allow potential transmission and establishment of arboviruses in these regions. Objective: The present work aims to monitor the presence of Arboviruses of medical importance such as Flavivirus, Alphavirus and Bunyavirus in species of dipterans collected in the states of Rondônia and Amazonas, Brazil. Methods: In this study, three RT-qPCR (Reverse Transcrption Quantitative Polymerase Chain Reaction) assays with Sybr Green were standardizes fot detection of Arboviruses (Flavivirus, Alphavirus and Bunyavirus). In addition, diptera species were captured in different regions throughout the Amazonas and Rondônia states between 2017-2019, and after a process of maceration and extraction nucleic acids were subjected to arbovirus research using standardized protocols. Results: The assays proved to be effective for researching interest arbovirus. To date, of the 9,299 dipterans collected approximately 6,798 dipterans have been processed and analyzed of which: 69.46% (n=4714) belong to the family Culicidae, 15.5% (n=1050) to Ceratopogonidae, 8.2% (n=555) to Psychodidae, 6.8% (462) to Tabanidae and 0.04% (n=3) to Simullidae divided into more than 35 distinct species. Flavivirus, Alphavirus or Bunyavirus were not detected from the total of the analyzed dipterans. Conclusion: Despite the good efficiency of the protocols there was no detection arbovirus in the analyzed mosquito pools. This work provides important data regarding the current Brazilian epidemiological situation especially in the possible "spot" of transmission and dissemination of these viruses without discarding the potential circulation in the regions studied.
 
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Publishing Date
2022-12-02
 
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