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Master's Dissertation
DOI
https://doi.org/10.11606/D.41.2022.tde-02092022-145215
Document
Author
Full name
Ianaê Ichikawa Ceschin
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2022
Supervisor
Committee
Okamoto, Oswaldo Keith (President)
Almodin, Carlos Gilberto
Guimarães, Ernesto da Silveira Goulart
Title in Portuguese
Avaliação funcional de embriões humanos doados para pesquisa: viabilidade, qualidade morfológica e potencial de geração de linhagem de células-tronco pluripotentes
Keywords in Portuguese
1. Células-tronco embrionárias
2. Teste genético pré implantacional
3. Aconselhamento genético
Abstract in Portuguese
As células-tronco embrionárias humanas (hESC) são um recurso precioso para pesquisadores que estudam biologia celular do desenvolvimento e terapia celular. Eles podem ser obtidos de embriões doados por tempo excedido de armazenamento congelado estipulado pela legislação ou por possuir anormalidades genéticas detectadas em teste genético pré-implantacional (PGT). No entanto, existem poucos estudos relatando a viabilidade de derivar linhagens de hESC de embriões com baixa qualidade morfológica e com anormalidades genéticas detectadas no PGT. Este estudo foi prospectivo e realizado de fevereiro de 2020 a abril de 2021 com 23 blastocistos humanos doados para pesquisa. Os embriões foram avaliados morfologicamente antes do procedimento de biópsia do trofectoderma ou congelamento e 24 horas após o descongelamento. Os embriões foram descongelados e colocados em condições de cultura apropriadas para a geração de hESC. A linhagem hESC foi avaliada com potencial de pluripotência por imunofluorescência, citometria de fluxo e diferenciação espontânea in vitro. A presença de aneuploidia foi avaliada por multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) e microarray comparative genomic hybridization (array-CGH). Dezessete blastocistos sobreviveram ao procedimento de descongelamento, dezesseis deles apresentaram viabilidade. Em relação a qualidade morfológica embrionária, com 24 horas após o descongelamento, 75% deles apresentaram baixa qualidade. Apenas um embrião, com ótima qualidade morfológica, que não foi realizado o PGT, foi capaz de gerar uma nova linhagem de hESC. A caracterização adicional da linha hESC revelou células-tronco euploides totalmente funcionais com pluripotência preservada. Esta linhagem de células euploides pode ser um recurso útil para o desenvolvimento humano e pesquisa básica. Embriões com baixa qualidade morfológica e com anormalidades genéticas no PGT, apresentam potencial limitado de expansão in vitro e de geração de linhagem de células-tronco embrionárias.
Title in English
Functional assessment of human embryos donated for research: viability, morphological quality and potential of generation a pluripotent stem cell line
Keywords in English
1. Embryonic stem cells
2. Preimplantation genetic test
3. Genetic counseling
Abstract in English
Human embryonic stem cells (hESC) are a precious resource for researchers studying developmental cell biology and cell therapy. They can be obtained from donated embryos with exceeding frozen storage time stipulated by legislation or the ones with genetic abnormalities detected in preimplantation genetic testing (PGT). However, there are few studies reporting the feasibility of deriving hESC lines from embryos with low morphological quality with genetic abnormalities in the PGT. This study was prospective and conducted from February 2020 to April 2021 with 23 human blastocysts donated for research. Embryos were morphologically evaluated before the trophectoderm biopsy or freezing procedure and 24 hours after thawing procedure. Embryos were thawed and placed in appropriate culture conditions for the generation of hESC. The hESC line was evaluated for pluripotency potential by immunofluorescence, flow cytometry, spontaneous differentiation in vitro. Presence of aneuploidy was evaluated by multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) and microarray comparative genomic hybridization (array-CGH). Seventeen blastocysts survived the thawing procedure, sixteen of them showed viability. Regarding the embryonic morphological quality, 24 hours after thawing, 75% of them presented low quality. Only one embryo, with excellent morphological quality, which was not submitted to PGT, was able to generate a new hESC lineage. Further characterization of the hESC line revealed fully functional euploid stem cells with preserved pluripotency. This euploid cell line could be a useful resource for human development and basic research. Embryos with low morphological quality and with genetic abnormalities in PGT, have limited potential for in vitro expansion and generation of embryonic stem cell line.
 
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Ianae_Ceschin.pdf (1.00 Mbytes)
Publishing Date
2022-09-14
 
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