Pseudomonas aeruginosa é uma gamma-proteobactéria ubiqua, principal causa de infecção nosocomial entre todos os patógenos relacionados à pneumonia na Unidade de Terapia Intensiva (UTI). Estamos interessados nos aspectos redox envolvidos nas interações hospedeiro-patógeno. A PaLsfA pertence à família da peroxirredoxinas (Prx) e ao subgrupo que contém apenas um cisteína catalítica (chamada 1-Cys Prx). As Prxs são enzimas capazes de remover peróxidos (incluindo peroxinitrito) em altas velocidades. Como a PaLsfA está relacionada à virulência de P. aeruginosa, pretendemos na presente tese avançar ainda mais na caracterização dessa proteína, abordando seus papéis biológicos em P. aeruginosa. Primeiro, avaliamos a constante de velocidade entre a ascorbato e PaLsfA, o único redutor desta proteína descrito até o momento. Além da importância de alguns aminoácidos relacionados à reação entre eles, que, surpreendentemente, para alguns mutantes, aumentou a reatividade em torno de dez vezes. Por diferentes abordagens microbiológicas, revelamos a importância de PaLsfA para a defesa bacteriana contra H2O2 e paraquat (um gerador de superóxido), mas não contra SIN-1 (gerador de peroxinitrito). Usando a sonda geneticamente codificada - Hyper7 - revelamos a capacidade de PaLsfA de proteger P. aeruginosa contra o H2O2 e a capacidade da ascorbato de atuar como um redutor intracelular de PaLsfA nesta bactéria. Além disso, descrevemos pela primeira vez uma atividade fosfolipase para uma Prx bacteriana, no entanto a implicação biológica desta atividade ainda necessita ser investigada. Finalmente, a capacidade de PaLsfA em influenciar o processo inflamatório em macrófagos é uma primeira descrição de uma Prx bacteriana influenciando a resposta inflamatória do hospedeiro, correlacionando-se com sua participação na virulência de P. aeruginosa. Dessa forma, nossos achados podem esclarecer a compreensão de como essa proteína afeta a virulência da P. aeruginosa e possibilitar futuro desenvolvimento sobre mecanismos inibitórios.

Pseudomonas aeruginosa is a ubiquitous, gamma-proteobacteria, which is the main cause of nosocomial infection among all pathogens related to pneumonia in the Intensive Care Unit. We are interested in the redox aspects involved in host-pathogen interactions. PaLsfA belongs to the peroxiredoxin (Prx) family and to the subgroup that contains only one catalytic cysteine (so-called 1-Cys Prx). Prxs are enzymes capable of removing peroxides (including peroxynitrite) at very high rates. As PaLsfA is related to the P. aeruginosa virulence we intended in the present thesis, further advance the characterization of this protein, regarding its biological roles in P. aeruginosa. We first evaluated the rate constant between ascorbate and PaLsfA, the only reductant of this protein until now. Also, the importance of some amino acids related to the reaction between them, which, surprisingly, for some mutants, increased the reactivity around ten times. By different microbiological approaches, we revealed the importance of PaLsfA for the bacterial defense against H2O2 and paraquat (a superoxide generator), but not against SIN-1 (peroxynitrite generator). Using the genetically encoded probe Hyper7 we revealed the capacity of PaLsfA protecting P. aeruginosa against H2O2 and the capacity of ascorbate to act as an intracellular reductant of PaLsfA in this bacterium. Additionally, we first described a phospholipase activity for a bacterial Prx, however the biological implication of this activity remains unclear. Finally, the capacity of PaLsfA influencing the inflammatory process in macrophages is a first description of a bacterial Prx influencing the host inflammatory response, correlating to its involvement with P. aeruginosa virulence. In this way, our findings can enlighten the understanding about how this protein affects the virulence of P. aeruginosai> and make possible future insights into inhibitory mechanisms.