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Master's Dissertation
DOI
10.11606/D.41.2010.tde-02022011-143444
Document
Author
Full name
Caique Fernandes de Souza
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2010
Supervisor
Committee
Silva, Eloiza Helena Tajara da (President)
Mingroni Netto, Regina Celia
Nunes, Fabio Daumas
Title in Portuguese
Validação do envolvimento dos genes KRT6A, KRT19, MSLN e KLK8 por RT-PCR quantitativa em tempo real em carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço
Keywords in Portuguese
Carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço
Expressão gênica
Abstract in Portuguese
Os carcinomas de cabeça e pescoço (CECPs) compreendem um grupo de tumores que atingem vários sítios do trato aerodigestivo superior, incluindo cavidade oral, orofaringe, hipofaringe e laringe. Esses carcinomas são clinicamente heterogeneous e resultam de modificações cumulativas em genes que regulam proliferação, migração celular e apoptose. São estimados aproximadamente 500.000 novos casos de CECP anualmente no mundo. No Brasil, cerca de 14.000 novos casos são esperados em 2010, somente para cavidade oral. As taxas de morbidade e mortalidade e as limitações das estratégias terapêuticas enfatizam a necessidade de um melhor entendimento dos padrões moleculares envolvidos na iniciação e na progressão desses tumores, e de abordagens preventivas e terapêuticas efetivas. Infelizmente, apesar da intensa pesquisa nessa área, poucos marcadores moleculares são conhecidos que exibam sensibilidade e especificidade para diagnóstico e prognóstico de CECP. Em um estudo prévio, nós avaliamos dados de três bibliotecas SAGE de carcinoma de laringe com a finalidade de identificar eventos associados ao desenvolvimento e à agressividade de CECP. Utilizando abordagens estatísticas e de Bioinformática, nós identificamos 60 genes com expressão elevada ou reduzida em tumores metastáticos versus não-metastáticos e em ambos os grupos versus tecidos normais. O objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão de quatro genes desta lista, os das queratinas 6A (KRT6A) e 19 (KRT19), da mesotelina (MSLN) e da calicreína 8 (KLK8), em um conjunto de 63 carcinomas primários de cabeça e pescoço e suas margens cirúrgicas e em quarto linhagens celulares (Hep-2, FaDu, SCC9 e UM-SSC-38) por RT-PCR em tempo real. Como amostra de referência para as linhagens, foram utilizados queratinócitos orais humanos normais, cultivados sobre uma camada de sustentação de fibroblastos irradiados. Todos os genes exibiram níveis de transcritos reduzidos ou ausentes nas linhagens celulares, exceto MSLN, que mostrou um padrão irregular de expressão. Em tumores primários, os genes KRT19 e MSLN apresentaram expressão diminuída em laringe, o mesmo sendo observado para o gene KLK8 em tumores de língua metastático. Além disso, foi detectada expressão elevada de MSLN e KLK8 em tumores não metastáticos de soalho de boca e expressão reduzida de KRT19 em tumores de soalho de boca e língua metastáticos. Os resultados levantam questões sobre o papel desses genes em processos biológicos associados com a tumorigênese de cabeça e pescoço e sobre sua participação no fenótipo neoplásico.
Title in English
Expression analysis of KRT6A, KRT19, MSLN and KLK8 genes by quantitative real time RT-PCR in head neck squamous cell carcinomas
Keywords in English
1. Gene expression
2. Head and neck squamous cell carcinoma
Abstract in English
Head and neck squamous cell carcinomas (HNSCCs) encompass a group of tumors that affect a variety of sites in the upper aero-digestive tract, including oral cavity, oropharynx, hypopharynx and larynx. These carcinomas are clinically heterogeneous and result from cumulative changes in genes that regulate cell proliferation, migration and death. It is estimated that approximately 500,000 new cases of HNSCC are diagnosed worldwide each year. In Brazil, about 14,000 new cases are expected in the year 2010, only in oral cavity. The morbidity and mortality rates and the limitations of therapeutic strategies emphasize the need for a better understanding of the molecular pathways involved in the initiation and progression of these tumors and for effective preventive and therapeutic approaches. Unfortunately, despite intense research, few molecular markers are known to exhibit sensitivity and specificity for the diagnosis or prognosis of HNSCC. In a previous study, we evaluated data from three SAGE libraries of larynx carcinoma in order to identify events associated with the development and aggressiveness of HNSCCs. Using statistical and bioinformatic tools, we identified sixty top-up and 60 top-downregulated genes in metastatic versus non-metastatic tumors and in both these tumors versus normal tissues. The objective of the present study was to evaluate the expression of four genes from this list, keratin 6A (KRT6A), keratin 19 (KRT19), mesothelin (MSLN) and kallikrein 8 (KLK8), in a set of 63 primary carcinomas of head and neck and their surgical margins and in four cell lines (Hep-2, FaDu, SCC9 and UM-SSC-38) by real time RT-PCR. As a reference sample for cell lines, we used normal human oral keratinocytes grown on irradiated fibroblast feeder layer. All genes exhibited no or decreased levels of transcripts in the cell lines, except MSLN, which displayed an irregular pattern of expression. In primary tumors, KRT19 and MSLN genes were downregulated in larynx, and KLK8 in metastatic tongue tumors. In addition, MSLN and KLK8 were upregulated in non-metastatic floor of the mouth tumors and KRT19 was down regulated in metastatic floor of the mouth and tongue tumors. The results open questions about the role of these genes on biological processes related to head and neck tumorigenesis and on neoplastic phenotype.
 
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caiqueSouza.pdf (7.38 Mbytes)
Publishing Date
2011-02-08
 
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