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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.25.2017.tde-16122021-154129
Documento
Autor
Nome completo
Vinicius Taioqui Pelá
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Bauru, 2017
Orientador
Banca examinadora
Buzalaf, Marilia Afonso Rabelo (Presidente)
Honório, Daniela Rios
Lima, Rafael Rodrigues
Pessan, Juliano Pelim
Título em inglês
Proteomic analysis of acquired pellicle formed on experimental composite resins containing or not filler and/or protease inhibitors: study in situ
Palavras-chave em inglês
Acquired Pellicle
Composite resins
Protease inhibitors
Resumo em inglês
In the oral cavity, any exposed surface is prone to the formation of the acquired pellicle (AP), an organic film, free of bacteria, which is formed in vivo as a result of the selective adsorption of salivary proteins and glycoproteins to the solid surfaces exposed to the oral environment. The objective of this work was to evaluate the influence of the addition or not of filler (Barium glass alumina silicate and silica) and/or protease inhibitors [epigallocatechin-3-gallate (EGCG) or chlorhexidine (CHX)] to experimental composite resins in the protein profile of the AP formed on these specimens, using quantitative label-free proteomic analysis. Three-hundred and twenty-four samples of bovine enamel (6x6x2mm) were prepared. A cavity (4x4mm) was made, filled with experimental resins and divided into 6 groups of 54 specimens each, according to the experimental groups: no filler, no inhibitor (NF-NI); filler, no inhibitor (F-NI); no filler plus CHX (NF-CHX); filler plus CHX (F-CHX); no filler plus EGCG (NF-EGCG); filler plus EGCG (F-EGCG). Nine young adults of both genders participated using a removable jaw appliance (BISPM - Bauru in situ pellicle model)) with 2 slabs of each group. The experiment was carried out in 9 consecutive days, during the morning for 120 minutes. The pellicle was obtained through the aid of electrodes filter paper moistened in 3% citric acid. The pellicles collected were processed for analysis by LC-ESI-MS/MS. The obtained MS/MS spectra were searched against human protein database (SWISSPROT). The proteomic data related to protein quantification were analyzed using the PLGS software. Difference in expression among the groups was expressed as p<0.05 for down-regulated proteins and 1-p>0.95 for up-regulated proteins. A total of 140 proteins were identified in the AP. From these, 16 were found in all the groups, among which are many proteins typically found in the AP, such as two isoforms of Basic salivary proline-rich protein, Cystatin-S, Cystatin-AS, Cystatin-SN, Histatin-1, Ig alpha-1 chain C region, Lysozyme C, Mucin-7, Proline-rich protein 4, Protein S100-A9, Salivary acidic proline-rich phosphoprotein ½, Statherin and Submaxillary gland androgen-regulated protein 3B. The total number of proteins identified in each group was 31, 51, 18, 38, 106 and 54 for NF-NI, F-NI, NF-CHX, F-CHX, NF-EGCG and F-EGCG, respectively. The respective amount of proteins exclusively in each group was 6, 14, 1, 6, 51 and 5. Most of the proteins that are not commonly described in the AP that have distinct functions in the organism, being involved in metabolism, cell signaling, cell adhesion, cell division, transport, protein synthesis and degradation were found most prominently in the NF-EGCG group. These results demonstrate that there was a difference in the protein profile of the AP due to the composition of the experimental resins, beyond offering important information on the development of restorative materials with components that can increase the protection in the oral cavity.
Título em português
Análise proteômica da película adquirida formada sobre resinas compostas experimentais contendo ou não carga e/ou inibidores de proteases: estudo in situ
Palavras-chave em português
Inibidores de protease
Película adquirida
Resinas compostas
Resumo em português
Na cavidade oral, qualquer superfície exposta é propensa à formação da película adquirida (PA), sendo considerada um filme orgânico, livre de bactérias que se forma in vivo como resultado da adsorção seletiva de proteínas e glicoproteínas salivares às superfícies solidas que estão expostas ao meio bucal. O objetivo deste trabalho será avaliar a influência da adição ou não de carga (vidro de bário alumina silicato e sílica) e/ou de inibidores de proteases (EGCG ou CHX) a resinas compostas experimentais no perfil proteico da PA formada sobre estes espécimes, utilizando estratégias proteômicas quantitativas livres de marcadores. Foram preparadas 324 amostras de esmalte bovino (6x6x2mm), foi feita uma cavidade no centro de 4x4mm, a qual foi preenchida com resinas experimentais. As amostras foram divididas em 6 grupos de 54 espécimes cada, de acordo com os grupos experimentais: Sem carga, sem inibidor (NF-NI); carga, sem inibidor (F-NI); sem carga e CHX (NF-CHX); carga e CHX (F-CHX); sem carga e EGCG (NF-EGCG); carga e EGCG (F-EGCG). Nove adultos jovens de ambos os gêneros paticiparam, usando um aparelho mandibular removível (BISPM - Bauru in situpellicle model) com duas amostras de cada grupo. O experimento foi conduzido por 9 dias consecutivos, durante a manhã por 120 minutos. A PA foi obtida através da ajuda do papel filtro de eletrotodo, umidecido em 3% de ácido cítrico. A película coletada, foi processada por LC-ESI-MS/MS. Os espectros MS/MS obtidos foram confrontados com bases de dados de proteínas humanas (SWISS-PROT). A quantificação livre de marcadores foi feita utilizando o software PLGS. A diferença de expressão entre os grupos foi expressa como p<0.05 para as proteínas down-regulated e 1-p>0.95 para as proteínas up-regulated. Um total de 140 proteínas foram identificadas na PA. Destas, 16 foram encontradas em comum em todos os grupos, dentre elas muitas proteínas típicas da PA, tais como, duas isoformas de Basic salivary proline-rich protein, Cystatin-S, Cystatin-AS, Cystatin-SN, Histatin-1, Ig alpha-1 chain C region, Lysozyme C, Mucin-7, Proline-rich protein 4, Protein S100- A9, Salivary acidic proline-rich phosphoprotein ½, Statherin e Submaxillary gland androgen-regulated protein 3B. O número total de proteínas identificadas em cada grupo foi 31, 51, 18, 38, 106 and 54 para NF-NI, F-NI, NF-CHX, F-CHX, NF-EGCG e F-EGCG, respectivamente. A respectiva quantidade de proteínas exclusivas de cada grupo foi 6, 14, 1, 6, 51 e 5. A maioria das proteínas que não são comumente descritas na PA e que tem funções distintas no organismos, estando envolvidas no metabolismo, sinalização celular, adesão celular, divisão celular, transporte, síntese proteica e degradação foram encontradas no grupo NF-EGCG. Estes resultados demonstram que houve uma diferença no perfil preteico da PA, devido à composição das resinas experimentais, além de oferecer informações importantes sobre o desenvolvimento de materiais restauradores com componentes que podem aumentar a proteção na cavidade oral.
 
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Data de Publicação
2021-12-16
 
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