Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a typically aggressive malignant tumor from the subgroup of head and neck cancers. Although there is an improvement in OSCC treatment, the 5-year survival rate remains unsatisfactory, mostly related to metastasis, a process increasingly associated to the presence and maintenance of cancer stem cells (CSC) subpopulation. CSCs exhibit higher rate of migration and metastatic potential compared to other tumor cells, and are able to undergo either epithelial-mesenchymal transition (EMT) or amoeboid transition to become more invasive and resistant, respectively. Therefore, understanding how CSCs act during tumor progression and its relationship with amoeboid/EMT transitions according to tumor site could be clinically relevant. Based on that, this study aimed to identify putative biomarkers of CSC, EMT and amoeboid phenotypes involved with poor prognosis in OSCC. Our findings demonstrated that higher immunopositivity of the CSCs markers ALDH1 and CD44, in contrast to decreased BMI-1 immunoexpression, might be considered predictors of metastasis. In addition, CD44^high immunostaining was specifically associated with lymph node capsular extravasation, while E-cadherin^low worsen 5-years OSCC survival rates. Positives correlations among CD44 and BMI-1 with E-cadherin indicate their possible biological relationship during OSCC progression. Considering the amoeboid genes, PRRX1 immunopositivity was associated with lymph nodes metastasis, while HOPX^high was associated with increase on the intensity of the peritumoral inflammatory infiltrate, both in central and ITF of non-metastatic tumors. In vitro, PRRX1 was upregulated in CA1 amoeboid cells compared to parental CA1, as well as to both parental and amoeboid LUC4 cells. Of note, the presence of CTCs was correlated with distant metastasis in OSCC patients. In summary, our results suggested that putative CSC markers ALDH1, CD44, p75NTR, and BMI-1, as well as E-cadherin, immunoexpression are associated with poor prognosis in a specific expression level and tumor site manner and, could be used as a panel for OSCC prognosis. Our data also propose that the increased immunoexpression of amoeboid protein PRRX1 could be associated with the amoeboid phenotype. Additionally, the correlation of CTCs with distant metastasis could represent an important role in the establishment of metastasis by CTCs related to the amoeboid phenotype. Although this link is still speculative in OSCC, it is possible to imply that amoeboid and CTCs phenotypes could be used to predict poor prognosis/oral cancer progression and metastasis in OSCC.

O carcinoma epidermóide de boca (CEB) é um tumor maligno tipicamente agressivo pertencente ao subgrupo de cânceres de cabeça e pescoço. Embora haja melhora no tratamento do CEB, a sobrevida de 5 anos permanece insatisfatória, principalmente em decorrência da presença de metástase, processo cada vez mais associado à presença e manutenção da subpopulação de células-tronco neoplásicas (CTN). As CTN apresentam maior taxa de migração e potencial metastático em comparação com outras células tumorais e podem entrar em transição epitelial-mesenquimal (TEM) e/ou transição ameboide para se tornarem mais invasivas e resistentes, respectivamente. Portanto, entender como as CTN atuam durante a progressão do tumor e sua relação com a TEM e/ou ameboide, apesar do local do tumor, pode ser clinicamente relevante. Baseado nisso, este estudo teve como objetivo identificar biomarcadores de CTN, TEM e fenótipos ameboides envolvidos com um pior prognóstico no CEB. Nossos achados demonstraram que a maior imunopositividade de ALDH1 e CD44 em contraste com a diminuição da imunoexpressão do BMI-1 podem ser considerados preditores de metástase. Além disso, a imunomarcação de CD44^high foi especificamente associado ao extravasamento capsular linfonodal, enquanto a E-caderina^low decaiu a taxa de sobrevida de 5 anos no CEB. Correlações positivas entre os biomarcadores CTN e E-caderina, especialmente entre CD44 e os demais, exibindo uma possível relação biológica na progressão do CEB. Correlações positivas entre CD44 e BMI-1 com E-caderina indicam sua possível relação biológica durante a progressão do CEB. Considerando os genes amebóides, PRRX1 foi associado a metástase linfonodal, enquanto o HOPX^high foi associado ao aumento da intensidade do infiltrado inflamatório peritumoral, tanto em tumores centrais quando no fronte e invasão em tumores não metastáticos. Em analises in vitro, a expressão de PRRX1 foi maior em células CA1 amebóides em comparação com CA1 parental, bem como, LUC4 parental e amebóide. De maneira importante, a presença de CTCs foi correlacionada com metástases à distância em pacientes com CEB. Em resumo, nossos resultados sugeriram que os marcadores candidatos de CTN, ALDH1, CD44, p75NTR e BMI-1, bem como a imunoexpressão de E-caderina, estão associados a prognóstico ruim em um nível de expressão específico e localização tumoral e podem ser usados como um painel para prognóstico do CEB. Nossos dados também estabelecem que o aumento da imunoexpressão de PRRX1 pode estar associada ao fenótipo amebóide. Adicionalmente, a correlação de CTCs com metástases à distância pode representar um papel importante no estabelecimento de metástases por CTCs relacionadas ao fenótipo amebóide. Embora esta ligação ainda seja especulativa no CEB, é possível sugerir que os fenótipos amebóides e CTCs podem ser usados para prever prognóstico ruim/progressão tumoral e metástase no CEB.