This thesis aimed to present two scientific papers. Article 1 approached a review of studies using stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs) in bone regeneration, highlighting the use in patients with cleft lip and palate (CLP). In Article 2, the objective was to compare the characterization of SHED between children with and without cleft lip and palate, to a view to analyzing whether autologous SHEDs may be considered as an option so that, soon, they can be used as an alternative in the reconstruction of alveolar clefts in patients with CLP. In Article 1, it was noted that in vitro and in vivo studies have been carried out so that bone regeneration can be performed with non-invasive materials, such as scaffolds and stem cells, including SHEDs. In vivo studies have shown that SHED can induce bone formation, produce dentin, and express neuronal markers. Although many efforts are being made because it is a promising alternative therapy that could bring benefits to the treatment and quality of life of many subjects, there are still few reports in the literature about its applicability, especially in subjects with CLP. In Article 2, dental pulp tissues were obtained from six healthy deciduous teeth in the exfoliation stage, from six donors aged between 4 and 12 years, and divided into two groups, without cleft lip and palate (Control Group) and with cleft lip and palate (Cleft Group). The cells obtained in the primary culture were analyzed immunophenotypically and collected those with positive expression of cell surface markers CD105, CD73, CD90 and negative for CD45, CD34, CD11b, CD19, HLA-DR (PE) after sorting in Flow Cytometry. The cells were subjected to multilineage differentiation and were morphologically analyzed. The difference immunophenotypic between groups was analyzed by Student's t-test, and the level of significance was set at 5% (p < 0.05). Plastic adhesion was demonstrated and high levels of MSC markers were identified in both groups, with positive expression of CD105, CD73, and CD90 (95% positive) and absence of hematopoietic lineage markers CD45, CD34, CD11b, CD19, and HLA- DR (2% positive). Pulp cells demonstrated adipogenic, osteogenic, and chondrogenic differentiation capacity. The morphological analysis identified a slightly smaller nucleus and proliferative capacity lower in the time evaluated in the Cleft group. There was a statistically significant difference (p=0.042) when comparing the SHEDs obtained after sorting from the two groups, being greater in the Cleft group. After confirming the standard criteria for defining multipotent MSCs in both groups, it was possible to confirm the isolation and characterization of SHED in all samples. These results suggest that SHEDs from children with CLP can be considered an option for future investigations into the autologous use of cells in therapeutic intervention. Notwithstanding, future studies are still needed to evaluate possible internal differences between cells, analyze the growth curve between groups and quantify osteogenic differentiation, aiming to identify whether the cleft could favor bone regeneration through tissue engineering.

Esta tese teve como objetivo apresentar dois artigos científicos. O Artigo 1, aborda uma revisão de estudos utilizando células-tronco de dentes decíduos humanos esfoliados (SHEDs) na regeneração óssea, salientando o uso em pacientes com fissuras labiopalatinas (FLP) e o Artigo 2, objetivou comparar a caracterização de SHED entre crianças com e sem fissuras labiopalatinas, a fim de analisar se as SHEDs autólogas podem ser consideradas uma opção para que, em breve, possam ser utilizadas para fins terapêuticos, como uma alternativa na reconstrução de fissuras alveolares em pacientes com FLP. No Artigo 1, foi possível observar que estudos in vitro e in vivo estão sendo realizados para que a regeneração óssea seja feita utilizando materiais não invasivos, com o uso de scaffolds e células-tronco como as SHEDs. Estudos in vivo mostraram que a SHED pode induzir a formação óssea, produzir dentina e expressar marcadores neuronais. No entanto, apesar de muitos esforços já feitos, por ser uma alternativa promissora que pode trazer benefícios para o tratamento e para a qualidade de vida de diversos pacientes, ainda há poucos relatos na literatura de aplicabilidade, principalmente em pacientes com FLP. No Artigo 2, tecidos pulpares foram obtidos de 6 dentes decíduos hígidos em estágio de esfoliação, de 6 doadores com idade entre 4 e 12 anos e divididos em dois grupos, sem fissura labiopalatina (Grupo Controle) e com fissura labiopalatina (Grupo Fissura). As células obtidas por cultura primária foram analisadas imunofenotipicamente, onde as que apresentaram expressões positivas dos marcadores de superfície celular CD105, CD73, CD90 e negativas de CD45, CD34, CD11b, CD19, HLA-DR (PE) foram coletadas após separação em Citometria de Fluxo. As células foram submetidas à diferenciação multilinhagem e foram analisadas morfologicamente. A diferença imunofenotípica entre os grupos foi analisada pelo teste t de Student e o nível de significância foi estabelecido em 5% (p <0,05). Foi demonstrada adesão plástica, e altos níveis de marcadores CTM foram identificados em ambos os grupos, com expressão positiva de CD105, CD73 e CD90 (95% positivo) e ausência de marcadores de linhagem hematopoiética CD45, CD34, CD11b, CD19 e HLA-DR (2% positivo). As células pulpares isoladas em todas as amostras demonstraram capacidade de diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. A análise morfológica identificou núcleo ligeiramente menor e capacidade proliferativa menor no tempo avaliado no grupo Fissura. Houve diferença estatisticamente significante (p = 0,042) na comparação das SHEDs obtidas após sorting nos dois grupos, sendo maior no grupo Fissura. Após a confirmação dos critérios padrão para definição de CTM multipotentes em ambos os grupos, foi possível confirmar o isolamento e a caracterização de SHED em todas as amostras. Esse achado sugere que SHEDs de crianças com FLP podem ser consideradas uma opção para investigações futuras sobre o uso autólogo de células em intervenção terapêutica. Não obstante, estudos futuros ainda são necessários para avaliar possíveis diferenças internas entre as células, analisar a curva de crescimento entre os grupos e quantificar a diferenciação osteogênica, visando identificar se a fissura poderia favorecer a regeneração óssea por meio da engenharia de tecidos.