As células-tronco são capazes de secretar, no meio em que são cultivadas, fatores tróficos importantes para a regeneração tecidual. Estudos já revelaram que o meio condicionado (MC) por células-tronco da polpa dentária humana (hDPSCs) pode desencadear respostas angiogênicas e de modulação da inflamação que podem ser importantes no processo de reparo. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da associação do MC pelas hDPSCs (MC-hDPSCs) e do MTA ProRoot no capeamento pulpar direto em ratos. Para isso, foram utilizados ratos da linhagem Wistar divididos em 5 grupos experimentais: CT (controle negativo; sem material capeador); BD (controle positivo; Biodentine); MTA (MTA ProRoot); MC (MC-hDPSC); e MTA+ (MTA ProRoot + MC-hDPSC). As hDPSCs foram descongeladas, recaracterizadas imunofenotipicamente através de citometria de fluxo e cultivadas até P4. Quando observada a subconfluência, as células foram incubadas com meio clonogênico fresco sem suplementação. Após 24h, esse meio foi coletado e centrifugado para obtenção do MC-hDPSC concentrado. Cavidades classe I foram preparadas na oclusal dos dois primeiros molares superiores de cada animal e uma pequena exposição pulpar padronizada foi realizada. O procedimento de capeamento pulpar foi realizado de acordo com cada grupo e, então, as cavidades foram seladas. Os animais foram sacrificados após 4 e 8 semanas (n=6 dentes por grupo e tempo experimental) e as peças foram preparadas para análise histológica. Os seguintes quesitos foram avaliados: formação de dentina reparadora, grau de cobertura das pontes formadas, vitalidade e condição do tecido pulpar. As células apresentaram perfil imunofenotípico de hDPSC. O grupo CT demonstrou 33,3% e 25% de formação de ponte dentinária nos tempos experimentais de 4 e 8 semanas, respectivamente. Essas pontes foram sempre incompletas e o tecido pulpar apresentou vitalidade somente em 33,3% das amostras em 4 semanas. O grupo MC apresentou formação de ponte em 100% das amostras em 4 semanas e em 60% das amostras em 8 semanas. Houve vitalidade pulpar em 100% das amostras em 4 semanas, mas essa taxa caiu para 20% em 8 semanas. Os grupos BD e MTA+ apresentaram formação de ponte em 100% das amostras nos dois tempos, enquanto o grupo MTA não foi capaz de formar pontes em 40% e 20% das amostras em 4 e 8 semanas, respectivamente. Ainda, dentina reparadora apresentando túbulos dentinários foi observada em algumas amostras apenas dos grupos MTA+ e BD. Todas as amostras (100%) apresentaram vitalidade pulpar para esses 3 grupos em 4 semanas. Quanto a condição do tecido pulpar vital, para BD, MTA e MTA+ houve maior porcentagem de tecido livre de inflamação no tempo de 8 semanas, se comparado ao de 4 semanas. MTA+ apresentou maiores taxas de tecido com ausência de sinais inflamatórios se comparado ao MTA isolado, sendo essas porcentagens de 75% para o grupo MTA+ e 25% para MTA em 8 semanas. O MChDPSC associado ao MTA demonstrou melhorias no desempenho da formação de ponte dentinária, organização do tecido neoformado e modulação da resposta inflamatória e parece demonstrar potencial promissor para aplicação em procedimentos capeadores.

Stem cells are able to secrete important trophic factors for tissue regeneration in the medium in which they are grown. Studies have revealed that human dental pulp stem cell (hDPSCs) conditioned medium (CM) can trigger angiogenic and inflammation modulation responses that may be important in the repair process. The aim of this study was to evaluate the effect of the association of CM by hDPSCs (CM-hDPSCs) and MTA ProRoot on direct pulp capping procedure in rats. For this, Wistar rats were used and divided into 5 experimental groups: CT (negative control; no capping material used); BD (positive control; Biodentine); MTA (MTA ProRoot); CM (CMhDPSC); and MTA+ (ProRoot MTA + CM-hDPSC). hDPSCs were thawed, immunophenotypically recharacterized by flow cytometry and cultured until P4. When subconfluence was observed, cells were incubated with fresh clonogenic medium without any supplementation. After 24h, this medium was collected and centrifuged to obtain concentrated CM-hDPSC. Class I cavities were prepared in the occlusal of the two first upper molars of each animal and a small standardized pulp exposure was performed. The pulp capping procedure was performed according to each group and then the cavities were sealed with Bulk Fill composite. The animals were sacrificed after 4 and 8 weeks (n = 6 teeth per group and experimental time) and the pieces were prepared for histological analysis. The following aspects were evaluated: reparative dentin formation, coverage degree of the formed bridges, vitality and pulp tissue condition. The cells showed hDPSC immunophenotypic profile. The CT group showed 33.3% and 25% of dentin bridge formation at the experimental times of 4 and 8 weeks, respectively. These bridges were always incomplete and pulp tissue showed vitality only in 33.3% of the samples at 4 weeks. The CM group showed bridge formation in 100% of the samples at 4 weeks and 60% of the samples at 8 weeks. Pulp vitality occurred in 100% of the samples at 4 weeks, but this rate dropped to 20% at 8 weeks. The BD and MTA+ groups showed bridge formation in 100% of the samples at both times, while the MTA group presented a 40% and 20% failure at 4 and 8 weeks, respectively. Still, reparative dentin presenting dentinal tubules was observed in some samples only for MTA + and BD groups. All samples (100%) showed pulp vitality for these 3 groups within 4 weeks. Regarding the condition of the vital pulp tissue, for BD, MTA and MTA+ there was a higher percentage of inflammation-free tissue at 8 weeks, compared to 4 weeks. MTA+ showed higher rates of tissue with no inflammatory signs compared to MTA used alone. These percentages were 75% for the MTA+ group and 25% for MTA at 8 weeks. CM-hDPSC associated with MTA has shown improvements in dentin bridge formation, neoformed tissue organization and inflammatory response modulation and seems to show promising potential for application in pulp capping procedures.