A papila apical representa uma fonte de odontoblastos primários, importantes durante a rizogênese. A instalação de um processo inflamatório na polpa pode evoluir para a necrose e interrupção da rizogênese. Dentre os mediadores envolvidos nestes processos inflamatórios estão os Endocanabinóides (ECbs) Anandamida (AEA) e 2-araquidonoilglicerol (2-AG), que podem modular diferentes funções celulares através da ativação dos receptores canabinóides (CB) 1 e 2, ou do receptor potencial transitório vanilóide 1 (TRPV1). O objetivo deste estudo foi investigar a expressão gênica de componentes do Sistema Endocanabinóide (ECS) e de TRPV1 em células-tronco de papila apical (stem cells of the apical papila, SCAPs), bem como o papel dos ECbs na modulação de funções celulares. SCAPs obtidas a partir de terceiros molares foram isoladas e estimuladas com LPS para avaliar a viabilidade celular, diferenciação, produção de citocinas e expressão gênica dos componentes do ECS, compondo as Fases 1 e 2 deste estudo. Na Fase 3, SCAPs foram tratadas com o antagonista de TRPV1 capsazepina (CPZ) e LPS. Na fase 4, SCAPs foram ativadas com os ECbs exógenos AEA e 2-AG para avaliar a viabilidade, diferenciação celular, produção de citocinas e a expressão gênica de marcadores de mineralização. Após 7 dias, não houve alteração na viabilidade de SCAPs após tratamento com LPS, mas ocorreu aumento na diferenciação celular no grupo tratado com LPS (0,1µg/mL), quando comparado ao grupo controle. Observou-se redução na produção de Osteoprotegerina (OPG) nos grupos estimulados com LPS a 0,1 e 10µg/mL e aumento de MCP-1 (Monocyte chemoattractant protein)/CCL-2 nos grupos com LPS a 1 e 10µg/mL, após 24h. A expressão gênica dos componentes do ECS e de TRPV1 foi observada em SCAPs, porém, não se observou expressão de CB1 e CB2. A ativação celular com LPS (10µg/mL) e CPZ não promoveu alteração na viabilidade celular (72h), diferenciação (14 dias) e produção de OPG e CCL-2 (24h), se comparados ao controle, independentemente do tratamento com CPZ. Os ECbs exógenos promoveram uma redução na viabilidade celular de maneira dose-dependente, porém, AEA não interferiu na diferenciação celular, independentemente de CPZ. Já 2-AG, em altas concentrações, inibiu a diferenciação celular. Não se observou diferença estatística na produção de RANKL (Receptor activator of nuclear kappa-B ligand) e TNF-? (Tumor Necrosis Factor Alpha) em nenhum grupo experimental. Houve aumento na produção de OPG nos grupos estimulados com AEA (com e sem LPS) e no grupo com 2-AG+LPS+CPZ. Ocorreu aumento na produção de IL-6 e CCL-2 nos grupos tratados com 2-AG, porém, não houve alteração nos grupos tratados com AEA. Observou-se redução na expressão de DMP-1 (Dentin matrix acidic phosphoprotein1) no grupo tratado com AEA e aumento da expressão de DSPP no mesmo grupo no período de 1 dia, comparado ao controle. Ocorreu aumento na expressão de TGF-?1 (Transforming Growth Factor ?-1) nos grupos tratados com AEA (com e sem CPZ) no período de 1 dia. Conclui-se que os principais componentes do ECS e TRPV-1 estão expressos em SCAPs, com exceção de CB1 e CB2. Em altas concentrações, os ECbs afetam a viabilidade e diferenciação de SCAPs.

The apical papilla is a source of primary odontoblasts, which play an important role during the root formation process. The initiation of an inflammatory process in the pulp can lead to pulp necrosis and the interruption of root formation. Among the mediators involved in inflammatory processes are the endocannabinoids (ECbs), anandamide (AEA), and 2-arachidonoylglycerol (2-AG), which can modulate different cell functions by activating cannabinoid receptors (CB) 1 and 2, and the transient receptor potential vanniloid 1 (TRPV-1). The aim of this study was to investigate the gene expression of the components of the endocannabinoid system (ECS) and TRPV-1 in the stem cells of the apical papilla (SCAPs) as well as the role of ECbs in the modulation of cell functions. SCAPs were isolated and stimulated using LPS to assess cell viability, differentiation, cytokine production, and the gene expression of the ECS components; these experiments represent phases 1 and 2 of this study. In phase 3, the SCAPs were treated with the TRPV-1 antagonist capsazepine (CPZ) and LPS. In phase 4, SCAPs were activated using exogenous ECbs, AEA, and 2-AG to assess viability, cell differentiation, cytokine production, and the gene expression of mineralization markers. After seven days of treatment with LPS, there was no change in SCAP viability; however, there was an increase in cell differentiation in the group treated with 0.1µg/mL LPS, when compared with the control. A reduction in the production of osteoprotegerin (OPG) was observed in the groups stimulated using 0.1 and 10 µg/mL LPS along with an increase in MCP-1 (monocyte chemoattractant protein) / CCL-2 in the groups treated with 1 and 10 µg/mL LPS after 24 h. The gene expression of the components of ECS and TRPV-1 was observed in the SCAPs; however, expression of CB1 and CB2 was not observed. Cellular activation with LPS (10 µg/mL) and CPZ did not affect cell viability (72 h), differentiation (14 days), or the production of OPG and CCL-2 (24 h), compared with the control, regardless of treatment with CPZ. Exogenous ECbs promoted a reduction in cell viability in a dosedependent manner; however, AEA did not inhibit cell differentiation, regardless of the presence of CPZ. At high concentrations, 2-AG inhibited cell differentiation. No statistical difference was observed in the production of RANKL (receptor activator of nuclear kappa-B ligand) and tumor necrosis factor alpha (TNF-?) between any of the experimental groups. There was an increase in OPG production in the groups stimulated by AEA (with or without LPS) and in the group stimulated by 2-AG + LPS + CPZ after 24h. There was an increase in the production of IL-6 and CCL-2 in the groups treated with 2-AG; however, there was no change in the groups treated with AEA. A reduction in the expression of DMP-1 (dentin matrix acidic phosphoprotein-1) was observed in the group treated with AEA and an increased expression of DSPP was observed in the same group in 1 day, in comparison with the control. There was an increase in the expression of TGF-?1 (transforming growth factor ?-1) in the groups treated with AEA (with and without CPZ) within 1 day. Thus, we concluded that the main components of the ECS and TRPV-1 are expressed in the SCAPs. However, CB1 and CB2 are not expressed in the SCAPs. Additionally, at high concentrations, ECbs may affect SCAP viability and mineralization.