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Master's Dissertation
DOI
Document
Author
Full name
Isaac Huang
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2018
Supervisor
Committee
Corrêa, Luciana (President)
Angrisano, Marcia Nishizawa
Deboni, Maria Cristina Zindel
Neves, Adriana da Costa
Title in Portuguese
Análise histomorfológica e imuno-histoquímica de fragmento de gengiva inserido em membrana corioalantóica de ovos fecundados de galinha
Keywords in Portuguese
Galinha
Gengiva
Membrana corioalantóica
Ovo
Abstract in Portuguese
A membrana corioalantóica (MCA) é uma das membranas extraembrionárias do embrião da galinha, cuja característica principal é ser muito vascularizada e permeável a trocas iônicas e gasosas. O ambiente onde está inserida permite o desenvolvimento de vários modelos experimentais, incluindo estudos de angiogênese, toxicologia e biocompatibilidade, bem como análise do processo de reparo e de carcinogênese de inúmeros tecidos. O objetivo deste trabalho foi verificar as alterações histomorfológicas de fragmentos de gengiva enxertados na MCA, com o intuito de verificar a viabilidade da utilização desse modelo em estudos envolvendo a mucosa oral. Fragmentos de gengiva foram coletados de pacientes submetidos a cirurgia de exodontia e enxertados na MCA de ovos fecundados de galinha após 9 dias de desenvolvimento embrionário. A coleta das gengivas foi feita após 1, 3 e 5 dias de inserção na MCA. As alterações morfológicas microscópicas foram anallisadas no decorrer do tempo no epitélio e na lâmina própria da gengiva e na MCA. Análise de TUNEL foi realizada para se comprovar a presença ou não de apoptose nos tecidos da gengivais. Foram realizadas também análises imuno-histoquímicas e quantificação da expressão de queratinas 10 (K10) e 14 (K14), para verificar as alterações de diferenciação epitelial, e CD34, para mensuração da vascularização. Do total de 25 ovos embrionados utilizados, 10 ovos receberam as gengivas para o experimento; o restante não mostrou viabilidade embrionária e foi descartado. Após 1 dia de inoculação, a interface MCA-gengiva exibiu intenso infiltrado inflamatório, o qual invadiu a lâmina própria. Após 5 dias, essa reação inflamatória ficou restrita à interface MCA-gengiva. As principais modificações morfológicas na gengiva foram observadas nos períodos de 3 e 5 dias de inoculação, em que houve perda da arquitetura do epitélio, mantendo-se somente a camada basal viável, e redução da celularidade na lâmina própria. Observou-se aumento da vascularização no período de 5 dias, atestada pela quantificação de vasos CD34 positivos. O epitélio remanescente exibiu ausência de estratificação e de expressão de K10, intensa marcação de K14 e células TUNEL negativas, sugerindo a presença de células epiteliais viáveis e pouco diferenciadas. Concluiu-se que a gengiva foi incorporada à MCA, com redução paulatina da reação inflamatória e revascularização, bem como manteve-se viável nesse ambiente em um período de 5 dias; contudo, sofreu processos de adaptação que incluíram a perda da estratificação epitelial e a redução da celularidade na lâmina própria.
Title in English
Histomorphological and imunohistochemistry analysis of gingival fragments inserted in chorioallantoic membrane of chicken eggs
Keywords in English
Chicken
Chorioallantoic Membrane
Egg
Gingival
Abstract in English
Chorioallantoic membrane (CAM) is one of the chicken embryo extra embryonic membrane, whose main characteristic is being very vascularized and permeable for ionic and gaseous exchanges. The environment where it is inserted allows the development of many experimental model, including studies about angiogenesis, toxicology and biocompatibility, as well as analysis of the repair process and carcinogenesis of many tissues. The objective of this study was to verify the histomorphological changes of gingival fragments grafted on CAM, with the intent to check the viability of this model in studies involving oral mucosa. Fragments of gingiva were collected from patients undergoing dental extraction and grafted on CAM of fertilized chicken egg after 9 days of embryonic development. The collect of gingiva were made after 1, 3 and 5 days of insertion on CAM. The morphological alterations were analyzed over the time in the epithelium and lamina propria of gingiva and CAM. TUNEL analysis were made to evaluate the presence or not of apoptosis in the gingival tissue. Imunohistochemistry and quantification of the expression of keratin 10 (K10) and 14 (K14) were also made to check any alteration of epithelial differentiation, and CD34, for measurement of vascularization. Total of 25 fertilized egg were used, 10 eggs received gingiva for experiments; remaining egg didn't show embrionary viability and were discarded. After 1 day of inoculation, the CAM-gingiva interface exhibited a intense inflammatory infiltrate, which invaded the lamina propria. After 5 days, this inflammatory reaction were restricted to the CAM-gingiva interface. The main morphological changes in the gingiva were observed between 3 to 5 days of inoculation, in which there was loss of epithelial architecture, only the basal layer were viable, and a reduction of cellularity in lamina propria. Were observed a increase of vascularization in period of 5 days, attested by the quantification of positive CD34 vessel. The remaining epithelia showed the absence of stratification and expression of K10, intense marking of K14 and TUNEL cell negative, suggesting the presence of viable epithelial cells and less differentiated. It was concluded that the gingiva was incorporated by CAM, with gradual reduction of inflammatory reaction and revascularization, as well remained viable in this environment in a period of 5 days; however, it underwent processes of adaptation that included the loss of epithelial stratification and the reduction of cellularity in the lamina propria.
 
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Publishing Date
2019-04-17
 
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