A regeneração óssea é um processo importante para oferecer tratamentos reconstrutivos mais rápidos e eficientes, no entanto, limitações técnicas continuam sendo um desafio, assim como a velocidade de formação e maturação óssea. Portanto, as pesquisas têm se voltado para técnicas alternativas na regeneração óssea e atualmente, a engenharia tecidual tem estudado o uso de células tronco para tratamento de perdas ósseas. A eficácia e a taxa de sucesso das diferentes técnicas e scaffolds foram avaliadas. Porém, há pouca informação sobre a eficácia combinada de carreadores xenógenos, células tronco de dentes decíduos esfoliados humano (SHEDs) e a terapia de fotobiomodulação (PBMT) na regeneração de defeitos ósseos. Baseado em estudos prévios, a proposta deste estudo foi avaliar, in vitro, a ação da PBMT, uma técnica com propriedades imunomodulatórias, angiogênicas e com capacidade de aumentar a adesão, proliferação e migração celular ao biomaterial tridimensional de osso bovino mineralizado desproteinizado com colágeno suíno a 10% (OBMDC), semeado com SHEDs, para acelerar e aumentar a taxa de formação óssea. Foi utilizado o laser de diodo, com comprimento de onda de 660nm; 40mW de potência; 3J/cm2 de densidade de energia e 2 segundos de tempo de aplicação após 24h e 72h do plaqueamento. Para avaliar a proliferação, as SHEDs foram descongeladas cultivadas, plaqueadas, semeadas no scaffold de OBMDC e divididas em 8 grupos: 1) Controle 15%; 2) Controle 5%; 3) OBMDC 15%; 4) OBMDC 5%; 5) Laser 15%; 6) Laser 5%; 7) OBMDC-L 15%; 8) OBMDC-L 5% e a análise de proliferação foi realizada por MTT. Para avaliar diferenciação celular, as amostras foram divididas em quatro grupos: 1) Grupo Controle clonogênico: SHEDs cultivadas em meio clonogênico; 2) Grupo Controle mineralizante: SHEDs cultivadas em meio mineralizante; 3) Grupo laser clonogênico: SHEDs cultivadas em meio clonogênico com aplicação de laser; 4) Grupo laser mineralizante: SHEDs cultivada em meio mineralizante com aplicação de laser. Para o grupo laser, as células foram irradiadas no período de 24h e 72h após o plaqueamento e todas as amostras fixadas para análise da formação dos depósitos de cálcio, através do ensaio de vermelho de alizarina após 23 dias de cultivo celular e os dados foram tratados estatisticamente (p0,05). Para avaliar a morfologia celular das SHEDs em todos os grupos, utilizou-se o microscópio invertido de fase em 24h e 72h após o plaqueamento. O grupo OBMDC-L 5% SFB em 72h, demonstrou maior proliferação celular que o grupo Controle (p=0.0286). O grupo laser no meio mineralizante apresentou maior formação de depósito de matriz mineralizada em comparação ao grupo controle em meio clonogênico, controle em meio mineralizante e laser em meio clonogênico (p<0,0001). Considerando as condições experimentais deste estudo, concluiu-se que, in vitro, as SHEDs, semeadas em scaffold OBMDC, proliferaram mais após 2 aplicações de PBMT e houve diferenciação osteogênica das células após 23 dias em meio mineralizante.

Bone regeneration is an important process provide faster and more efficient reconstructive treatments. However, technical limitations remain a challenge, such as the speed of bone formation and maturation. Therefore, this research has focused on current alternative techniques in bone regeneration such as tissue engineering stem cells to treat bone loss. The effectiveness and success rate of different techniques and scaffolds were evaluated. However, there is little information about the combined efficacy of xenogeneic carriers, human exfoliated deciduous teeth stem cells (SHEDs) and photobiomodulation therapy (PBMT) in the regeneration of bone defects. Based on previous studies, the hypothesis arose of applying PBMT, a technique with immunomodulatory, angiogenic properties to increase cell adhesion, proliferation and migration on deproteinized bovine bone mineral with 10% porcine collagen (OBMDC), seeded with SHEDs, in order to investigate the acceleration and increase the rate of bone formation. The purpose of this study is to evaluate, in vitro, PBMT in a three-dimensional scaffold of OBMDC, seeded with SHEDs. The laser used was the diode, with a wavelength of 660nm; 40mW of power; 3J/cm2 of energy density in 2 seconds after 24h and 72h of plating. To assess proliferation, SHEDs were thawed, cultured, plated, seeded on the OBMDC scaffold and divided into 8 groups: 1) Control 15%; 2) Control 5%; 3) OBMDC 15%; 4) OBMDC 5%; 5) Laser 15%; 6) Laser 5%; 7) OBMDC-L 15%; 8) OBMDC-L 5%. In the laser group, PBMT was applied at 24h and 72h after plating and the analysis was performed by MTT. To evaluate cell differentiation, the samples were divided into four groups: 1) Clonogenic Control Group: SHEDs cultivated in clonogenic medium; 2) Mineralizing Control Group: SHEDs grown in mineralizing medium; 3) Clonogenic laser group: SHEDs grown in clonogenic medium with laser application; 4) Mineralizing laser group: SHEDs cultivated in mineralizing medium with laser application. For the laser group, the cells were irradiated within 24h and 72h after plating and all samples were fixed for analysis of calcium deposit formation, using the alizarin red based assay after 23 days of cell culture. To assess the cell morphology of SHEDs, samples from the groups were analyzed under the inverted phase microscope at 24h and 72h after plating. The laser applied at SHEDs in an OBMDC scaffold with 5% FBS in 72h showed greater cell proliferation compared to the control group (p=0.0286). The mineral laser group showed greater formation of mineralized matrix deposits compared to the clonogenic control, mineralized control and clonogenic laser group (p<0.0001). Considering the experimental conditions of this study, it was concluded that, in vitro, SHEDs, seeded in an OBMDC scaffold, proliferated more after 2 applications of PBMT and there was osteogenic differentiation of cells after 23 days in mineralizing medium.