O carcinoma de células escamosas é a neoplasia mais comum da cavidade oral, sendo a língua e assoalho as estruturas mais afetadas. A invasão angiolinfática e perineural por células neoplásicas, em decorrência da exuberante vascularização e inervação regional facilitam, nesse tipo tumoral, a disseminação metastática e agravam o prognóstico da doença exigindo terapias mais agressivas para controle da doença. Os mecanismos de invasão pelo carcinoma de células escamosas ainda são pouco esclarecidos, mas aparentemente dependem da interação do aparato celular com o seu microambiente, sendo a plasticidade do citoesqueleto processo importante nesse cenário. As citoqueratinas, filamentos intermediários do citoesqueleto, desempenham, além da manutenção da estrutura de células epiteliais, diversas outras funções que podem ter impacto no processo de invasão das células neoplásicas. Acredita-se que as células tumorais mantêm a expressão das citoqueratinas semelhante ao epitélio de origem; uma mudança no padrão de expressão das citoqueratinas em resposta ao processo de invasão tumoral pode ser uma hipótese para explicar a invasão em estruturas específicas. O objetivo deste estudo foi analisar se existe alteração na expressão de diferentes citoqueratinas no carcinoma de células escamosas de língua e assoalho bucal no processo de invasão tumoral. Foi realizada análise imunoistoquímica para CK5, CK7, CK10, CK13, CK14, CK16, CK18, CK19, D2-40, CD31 e S-100 de 29 tumores primários e 20 metástases regionais. Foram realizados experimentos in vitro utilizando a linhagem SCC-9, para a investigação da migração e proliferação sob efeito dos fatores de crescimento FGF, NGF e VEGF. A expressão da CK14, CK16 e CK18 sob efeito dos mesmos fatores foi avaliada por citometria de fluxo. Os tumores, em geral, expressaram na massa tumoral as citoqueratinas primárias do epitélio (CKs 5/14), com alguns casos apresentando redução ou perda de sua expressão. As citoqueratinas CK10, CK13 e CK16 apresentaram alteração no seu padrão de expressão em comparação com o padrão normal, e foi observada a positividade de citoqueratinas de epitélio simples (CKs 7, 18 e 19) que não aparecem na mucosa normal. Foram encontradas associações entre a ausência da expressão da CK16 no tumor primário e invasão perineural (p=0,0001); CK19 positiva e focal na massa tumoral e invasão perineural (p=0,038) e recidiva nos casos positivos para CK19 no tumor primário (p=0,014). Também foram encontradas outas associações entre a expressão dessas proteínas em metástases regionais e variáveis clínicas, prognósticas e histopatológicas. As metástases regionais apresentaram, em sua maioria, alteração na expressão das proteínas analisadas em comparação com o tumor primário. Também foi possível observar a expressão positiva das proteínas D2-40 e S-100 nas células tumorais, ausentes nos queratinócitos mucosa oral. Os resultados dos experimentos in vitro sob estímulo dos fatores de crescimento mostraram um aumento no número de células positivas e intensidade de expressão das CKs 14, 16 e 18, sendo que as alterações foram mais acentuadas no intervalo de tempo de 24h. Foi observado um aumento significante da migração celular sob estímulo do VEGF. As taxas de proliferação celular apresentaram um aumento significante sob estímulo do FGF e NGF após o período de 48 horas e 72 horas de incubação. Os resultados encontrados, em conjunto, fornecem evidências de uma alteração no padrão de expressão das citoqueratinas no processo de invasão e metástase.

Squamous cell carcinoma (SCC) is the most common neoplasm of the oral cavity and the tongue and floor of the mouth are the most affected structures. Angiolymphatic and perineural invasion by tumor cells are common in this neoplasm, once these organs present rich vascularization, innervation, and lymphatic drainage. The metastatic dissemination worsens the diseases prognosis, requiring aggressive treatments to control the disease. Nevertheless, the invasion mechanisms of SCC evolution are still unclear but seem to depend on the interaction of tumor cells and their surrounding microenvironment. The cytoskeleton plasticity is an important process in this scenery. Cytokeratins (CKs) are cytoskeleton intermediate filaments, maintaining the tridimensional structure of epithelial cells and playing a lot of other functions that could impact the invasion process by tumor cells. The tumor cells generally keep the cytokeratin expression similar to the original epithelial tissue. Modifications in CKs expression patterns in response to the invasion process could be a hypothesis to explain the invasion in specific structures, once these proteins have functions in other cellular mechanisms. The objective of this study was to analyze possible alterations in the cytokeratins expression in the invasion process of the tongue and floor of the mouth SCC. Immunohistochemical analysis was performed for CK5, CK7, CK10, CK13, CK14, CK16, CK18, CK19, D2-40, CD31, and S-100 in 29 primary tumors and 20 regional metastasis of oral SCC. In vitro cell culture assays were performed using SCC-9 cells to investigate tumor cell migration and proliferation under the effect of growth factors FGF, NGF, and VEGF. The expression of CK14, CK16, and CK18 under the growth factors effect was evaluated by flow cytometry. Cytokeratins CK10, CK13, and CK16 presented modifications in their expression pattern compared to the normal pattern, as well the simple epithelial keratins (CK7, CK18, and CK19) presented positive expression, which is not observed in normal mucosa. We found associations between negative CK16 expression and perineural invasion (p=0,0001); focal and positive CK19 and perineural invasion (p=0,038) and relapse in positive cases (p=0,014). We also found associations between the expression of these proteins in regional metastasis and clinical, histopathological, and prognostic parameters. Mostly regional metastasis presented different protein expression compared to primary tumors. D2-40 and S-100 positivity was detected in tumor cells, which is absent in normal keratinocytes of the oral mucosa. In vitro assays results showed an increase in the number of positive cells and in the expression intensity of CK14, CK16, and CK18. These alterations were more expressive after 24-hour incubation. We observed a significant increase in cell migration under the effect of VEGF. Proliferation cell rates increased significantly under the effect of FGF and NGF after 48-hour and 72-hour incubation. These results show evidence of important alterations in cytokeratin expression in the invasion and metastasis process.