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Thèse de Doctorat
DOI
https://doi.org/10.11606/T.23.2020.tde-30082021-104459
Document
Auteur
Nom complet
Thais Gimenez Miniello
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2020
Directeur
Jury
Marques, Marcia Martins (Président)
Júnior, Celso Augusto Lemos
Cara, Sueli Patricia Harumi Miyagi de
Carvalho, Rejane Andrade de
Titre en portugais
Investigação do uso de cell sheet de células-tronco da polpa dentária humana associada ou não à terapia de fotobiomodulação ou à terapia fotodinâmica antimicrobiana no tratamento da necrose óssea dos maxilares por medicamentos antirreabsortivos em ratos
Mots-clés en portugais
Bisfosfonatos
Células-tronco
Fotobiomodulação
Laserterapia
Medicamentos antirreabsortivos
Membranas celulares
Necrose óssea dos maxilares
Regeneração óssea
Zolendronato
Resumé en portugais
Necrose óssea dos maxilares por medicamentos anti-reabsortivos (MRONJ do inglês medication-related osteonecrosis of the jaws) é uma condição progressiva sem tratamento eficaz até o momento. A engenharia tecidual e as terapias celulares, ambas mediadas por células-tronco (CTs) poderiam ser aplicadas para este fim associadas ou não a terapias baseadas em biofotônica, como fotobiomodulação (PBMT do inglês photobiomodulation therapy) capaz de melhorar a regeneração tecidual, e a terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT do inglês antimicrobial photodynamic therapy) capaz de diminuir a infecção de feridas. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da aplicação de membranas celulares (MCs, do inglês Cell Sheets) de CTs da polpa dentária humana (hDPSCs do inglês human dental pulp stem cells), associadas ou não às terapias de PBM e/ou aPDT, na regeneração de lesões ósseas causadas pelo uso de zolendronato (ZLN) em cavidade oral de ratos. O estudo foi composto por 2 etapas: uma in vitro, onde as MCs foram obtidas, e uma in vivo onde foram utilizados 60 ratos Wistar. MCs de hDPSCs (do inglês human dental pulp stem cells) foram obtidas para serem aplicadas em alguns dos grupos experimentais do estudo in vivo. Lesões de MRONJ foram induzidas por ZLN em resposta a exodontias de molares superiores. Esses animais foram distribuídos nos grupos experimentais de acordo com o tratamento aplicado, a saber: (CN): Controle negativo: somente tratamento cirúrgico; (MC): tratamento cirúrgico e aplicação da MC; (MC+PBMT): tratamento cirúrgico seguido de aplicação de MC e de PBM; (aPDT+MC): tratamento cirúrgico, seguido de aPDT e aplicação de MC. Animais normoreativos (que não receberam o ZLN) constituíram o grupo (CP): Controle positivo. Sete e 28 dias após o tratamento, as maxilas de todos os animais foram fixadas e submetidas às análises: por Microtomografia Computadorizada (MicroCT), histológica (HE) e histoquímica (Tricrômico de Masson). Os dados foram tratados estatisticamente (p<=0,05). Em nenhum dos grupos a mucosa que recobria as lesões de MRONJ fecharam por completo. Aos 7 dias os resultados de MicroCT foram similares em todos grupos. Em 28 dias semanas, apenas a avaliação do volume ósseo (VO) mostrou diferenças entre os grupos, sendo que o grupo tratado com a MC apresentou volume significativamente maior (p = 0,0249) do que todos os outros grupos. As avaliações histológicas e histoquímicas mostraram que em todos os grupos onde a MC foi aplicada houve uma resposta de intensa formação óssea em ambos os tempos experimentais, tanto para dentro da lesão quanto para fora da cortical óssea. Tecido similar a tecido dentinário foi observado em alguns espécimes dos grupos que receberam a MC. Nos grupos onde a PBMT ou a aPDT foram aplicadas o osso neoformado apresentou-se mais organizado e maduro, inclusive com aspecto lamelar. Baseado nos resultados podemos inferir que a aplicação de MCs de hDPSCs associadas ou não à PBMT ou aPDT no tratamento de lesões de MRONJ pode colaborar para a mais rápida e organizada resposta de neoformação óssea.
Titre en anglais
Investigation of use of cell sheet of human dental pulp stem cells associated or not with photobiomodulation therapy or antimicrobial photodynamic therapy in the treatment of bone necrosis of the jaws by antiresorptive drugs in rats
Mots-clés en anglais
Anti-resorptive drugs
Bisphosphonates
Bone necrosis of the jaws
Bone regeneration
Cell membranes
Lasertherapy
Stem cells
Zoledronate
Resumé en anglais
Medication-related osteonecrosis of the jaws (MRONJ) is a progressive condition without effective treatment to date. Tissue engineering and cell therapies, both mediated by stem cells (CTs) could be applied for this purpose associated or not to therapies based on biophotonics, such as photobiomodulation therpay (PBMT), capable of improving tissue regeneration, and antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) capable of decreasing infection of wounds. The aim of this study was to evaluate the effect of the application of cell sheets (CSs) of human dental pulp stem cells (hDPSCs), associated or not with PBM and / or aPDT therapies, in the regeneration of bone lesions caused by the use of zolendronate (ZLN) in the oral cavity of rats. The study consisted of 2 steps: one in vitro, where the MCs were obtained, and one in vivo, where 60 Wistar rats were used. HDPSCs CSs were obtained to be applied in some of the experimental groups of the in vivo study. MRONJ lesions were induced by ZLN in response to extraction of maxillary molars. These animals were distributed in the experimental groups according to the treatment applied, namely: (NC): Negative control: only surgical treatment; (CS): surgical treatment and application of CS; (CS + PBMT): surgical treatment followed by application of CS and PBM; (aPDT + CS): surgical treatment, followed by aPDT and application of CS. Normoreactive animals (that did not receive the ZLN) constituted the positive control (PC). Seven and 28 days after treatment, the jaws of all animals were removed, fixed and subjected to analysis: by Computerized Microtomography (MicroCT), histologiy (H&E) and histochemistry (Masson's Trichrome). The data were treated statistically (p<=0.05). In none of the groups the mucosa covering the MRONJ lesions was completely close. At 7 days, all microCT results were similar in all groups. At 28 days weeks, only the assessment of bone volume (BV) showed differences between the groups, and the group treated with CS alone had a significantly higher volume (p = 0.0249) than all the other groups. Histological and histochemical evaluations showed that in all groups where CS was applied, there was a response of intense bone formation in both experimental times, both inside the lesion and outside the bone cortex. Dentin-like tissue was observed in some specimens of the groups that received CS. In the groups where PBMT or aPDT were applied, the newly formed bone was more organized and mature, even with a lamellar aspect. Based on the results, we can infer that the application of hDPSC CSs associated or not to PBMT or aPDT in the treatment of MRONJ lesions can contribute to the faster and organized response of new bone formation.
 
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Date de Publication
2021-10-21
 
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